【摘 要】
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目的 采用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的肌细胞营养不良模型和核糖核酸干扰技术,研究Atrogin-1基因沉默对肌细胞营养不良的保护作用.方法 设计5对Atrogin-1-siRNA靶序列及对
【机 构】
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上海复旦大学附属中山医院普外科,200032
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目的 采用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的肌细胞营养不良模型和核糖核酸干扰技术,研究Atrogin-1基因沉默对肌细胞营养不良的保护作用.方法 设计5对Atrogin-1-siRNA靶序列及对照序列,逐步克隆到慢病毒核心载体FG12中,重组FG12与三种包装质粒(pRSVREV、pMDLg/pRRE、pHCMV-G)共同转染293T细胞以包装病毒,感染C2C12细胞,并将其分化成肌管,用TNF-α进行刺激,实时荧光定量PCR法、Western blot法检测肌管中Atragin-1表达,观察比较各组肌管的形态学变化.结果 重组载体中含大小、序列正确的片段,能成功感染C2C12细胞,TNF-α能引起对照组肌管Atrogin-1表达上调、肌管萎缩,但RNA干扰组肌管无此现象.结论 沉默Atrogin-1基因可避免产生TNF-α诱导的肌细胞营养不良,Atrogin-1基因可作为肿瘤恶液质的理想治疗靶点.
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