【摘 要】
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目的 :利用酵母双杂交系统筛选KGF 2的相互作用蛋白 ,为阐明其分子作用机制提供有益线索。方法 :通过聚合酶链反应从人胎肝cDNA文库中钓取KGF 2cDNA ,构建诱饵蛋白载体pAS2
【机 构】
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军事医学科学院基础医学研究所; 军事医学科学院基础医学研究所 北京100850; 北京100850; 北京100850;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目 (3 0 2 714 80 )
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目的 :利用酵母双杂交系统筛选KGF 2的相互作用蛋白 ,为阐明其分子作用机制提供有益线索。方法 :通过聚合酶链反应从人胎肝cDNA文库中钓取KGF 2cDNA ,构建诱饵蛋白载体pAS2 1 KGF 2 ,并对其自身转录激活活性进行鉴定 ,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝cDNA文库 ,挑选双阳性克隆。将KGF 2和候选蛋白分别克隆至哺乳动物细胞双杂交的BD、AD质粒中 ,共同转染COS 7细胞 ,通过CAT分析验证KGF 2和候选蛋白之间的相互作用。结果 :VDNA序列分析和同源检索显示所获候选蛋白为PRO2 6 0 5。以KGF 2和PRO2 6 0 5cDNA共转化酵母宿主Y190后可激活报道基因 ,但共转染COS 7细胞后 ,CAT分析结果阴性。结论 :KGF 2和PRO2 6 0 5在酵母体内存在相互作用 ,但在COS 7细胞中未能检测到两者的相互作用。
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