以“末端修饰法”构建人基因组的酵母人工染色体克隆

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采用“末端修饰法”修饰酵母人工染色体载体与基因组插入片段的酶切末端,并优化各个实验参数,成功地得到了4000多个YAC片段的克隆群,转化率为400 ̄500转化子/μgDNA。经随机抽样初步鉴定:80%的阳性克隆能检出人工染色体,插入片段的大小范围为150 ̄750kb,平均为450kb,载体连接实验检测表明,末端修饰法能有效防止“共连接”的发生。
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