微RNA-939靶向启动子区调控CD2相关蛋白的表达

• 作 者: 黄玉萍 邱灵芝 徐锦雯 赵丽萍 李羚 周国平
• 机 构: 210029 南京医科大学第一附属医院儿科,210029 南京医科大学第一附属医院儿科,214043 无锡，南京医科大学附属无锡人民医院儿童医院肾脏科,214043 无锡，南京医科大学附属无锡人民医院
• 出 处: 中华实用儿科临床杂志
• 发表日期: 2016年31期
• 关键词: 微 RNA-939 CD2 相关蛋白 足突细胞 启动子 基因表达调控

目的

验证微RNA-939(microRNA-939，miR-939)与CD2相关蛋白(CD2AP)的靶向调控关系。

方法

用RegRNA软件预测人CD2AP启动子区潜在的miR-939结合位点。将人CD2AP启动子荧光素酶报告基因重组质粒pGL3-2K与microRNA阴性对照物(miR-NC)或miR-939模拟物瞬时共转染HEK-293T细胞，24 h后测定相对荧光素酶活性。用miR-NC或miR-939模拟物转染HEK-293T细胞48 h，反转录-实时荧光定量PCR检测CD2AP mRNA表达水平，Western blot检测CD2AP蛋白表达水平。

结果

1.CD2AP启动子区存在2个miR-939结合位点，分别位于起始密码子ATG(定位＋1)上游－468～－491和－654～－677。2.在30 nmol/L、50 nmol/L水平，miR-NC组和miR-939组的相对荧光素酶活性分别为6.81±0.88比6.07±2.24、5.88±1.44比3.94±0.79，2组间差异均无统计学意义(t＝3.04、2.06，P均>0.05)；达100 nmol/L水平时，荧光素酶活性分别为5.58±0.58比3.29±0.64，差异有统计学意义(t＝4.07，P<0.05)。3.在30 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L水平，miR-NC组和miR-939组的CD2AP mRNA相对表达量分别为1.00±0.01比0.80±0.08、1.00±0.00比0.80±0.13、1.00±0.00比0.72±0.07，CD2AP mRNA水平在各浓度均下调20%～30%，组间差异有统计学意义(t＝4.44、2.93、6.84，P均<0.05)。4.在50 nmol/L水平，miR-NC组和miR-939组的CD2AP蛋白相对表达量为0.48±0.09比0.19±0.12，CD2AP蛋白表达水平下调，差异有统计学意义(t＝3.36，P<0.05)。

结论

CD2AP是miR-939的靶基因，miR-939通过靶向启动子区下调CD2AP的转录和表达，提示miR-939可能介导足突细胞的损伤。