【摘 要】
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目的 获取人载脂蛋白A～I (ApoA～I)的重组蛋白,并用于多克隆抗体的制备.方法 从人肝细胞(L02)中提取总RNA后,经RT～ PCR法得到人ApoA-I基因片段,用以构建融合表达载体pGEX-6P-1- A
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目的 获取人载脂蛋白A～I (ApoA～I)的重组蛋白,并用于多克隆抗体的制备.方法 从人肝细胞(L02)中提取总RNA后,经RT～ PCR法得到人ApoA-I基因片段,用以构建融合表达载体pGEX-6P-1- ApoA-I的重组质粒;将该重组质粒转化至大肠埃希菌BI21中,用异丙基硫代～β～D～半乳糖苷(IPTG )诱导表达GST～ApoA ～I包涵体蛋白,通过蛋白复性和纯化后免疫小鼠得到多克隆抗体,并用ELISA法检查其效价.结果 经PCR扩增出的ApoA～I基因片段(7466p)与理论值大小基本一致.SDS～PAGE(十二烷塞磺酸钠～聚丙烯凝胶电泳)以及Western blotting(蛋白印迹分析)验证纯化后的蛋白质分子量与质谱分析数据相符.免疫小鼠所得的免疫血清通过ELISA显示其抗体效价也具有高度特异性.结论 成功地在大肠埃希菌中诱导表达出了ApoA-I,蛋白质通过纯化免疫小鼠,得到了特异性的多克隆抗体.
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