【摘 要】
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目的 在毕赤酵母中表达花烟草植物防御素1 (Nicotiala alata defensin 1,NaD1)蛋白,并进行纯化.方法 重组表达质粒pPIC9K-NaD1经Sac Ⅰ内切酶线性化后,电转化至感受态毕赤酵
【机 构】
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贵州大学茶学院山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室贵州省农业生物工程重点实验室,贵州贵阳550025;武汉金开瑞生物工程有限公司,湖北武汉430223
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目的 在毕赤酵母中表达花烟草植物防御素1 (Nicotiala alata defensin 1,NaD1)蛋白,并进行纯化.方法 重组表达质粒pPIC9K-NaD1经Sac Ⅰ内切酶线性化后,电转化至感受态毕赤酵母GS115,采用甲醇进行小量诱导表达,选择表达量相对较高的单菌落进行扩大培养,获得大量重组蛋白NaD1,经Ni-NTA亲和层析纯化后,对纯化产物进行15％ SDS-PAGE分析及Western blot检测.结果 纯化产物相对分子质量约20000,可与小鼠抗NaD1单克隆抗体发生特异性结合,于相对分子质量约20000处可见特异性结合条带,蛋白纯度达85％.结论 在毕赤酵母中成功表达了NaD1蛋白,纯化后纯度较高,本实验为后续NaD1蛋白杀伤真菌作用机制的研究奠定了基础.
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