目的观察不同活化状态肝星状细胞 (HSC) 对外源性转化生长因子-β1(TGF-β1)旁分泌刺激的生物学效应作用. 方法原代分离培养大鼠HSC,无包被塑料培养皿上分别培养1、4、7d,细胞处于静止、中间活化与完全活化状态,继以10～500pmol/L TGF-β1温育细胞24h,3H-TdR掺入法测定细胞增殖,western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与I型胶原蛋白表达沉积,3H-脯氨酸掺入与胶原酶消化法测定细胞总胶原的分泌量.100pmol/L TGF-β1温育细胞15～90min,northern blot法检测细胞I型前胶原mRNA的表达水平. 结果 TGF-β1浓度依赖性抑制培养1d HSC的细胞增殖,10～500pmol/L TGF-β1浓度组细胞内3H-TdR掺入率分别为对照组的52.8%～16.8%,与对照组比较,q值为5.44～10.37,P<0.01.但TGF-β1对培养4d与7d的细胞增殖无影响.随细胞活化,HSC基础性α-SMA、I型胶原蛋白与mRNA水平明显增加,而TGF-β1刺激各培养时间HSC以上蛋白与基因的表达.培养1、4、7d HSC基础水平与TGF-β1刺激的总胶原分泌量分别为(804±274)dpm/孔与(1200±708)dpm/孔;(2966±1701)dpm/孔与(6160±1123)dpm/孔;(2580±767)dpm/孔与(4583±1467)dpm/孔,后2组组内比较,t值分别为3.84与2.96,P<0.01或P<0.05.以培养4d HSC的总胶原分泌与α-SMA表达的效应增加较为明显. 结论 TGF-β1明显抑制静止HSC的细胞增殖,对活化状态HSC生长无影响,促进各种活化状态HSC的表型活化与胶原生成,TGF-β1对活化过程中HSC的增殖与胶原生成功能发生岐化.中间活化状态HSC对TGF-β1促表型活化与胶原生成最为明显,可以作为较理想的药理研究细胞模型.
转化生长因子β1对不同活化状态肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原表达的影响
【摘 要】
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目的观察不同活化状态肝星状细胞 (HSC) 对外源性转化生长因子-β1(TGF-β1)旁分泌刺激的生物学效应作用. 方法原代分离培养大鼠HSC,无包被塑料培养皿上分别培养1、4、7d,细胞处于静止、中间活化与完全活化状态,继以10～500pmol/L TGF-β1温育细胞24h,3H-TdR掺入法测定细胞增殖,western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与I型胶原蛋白表达沉积
【机 构】
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200032,上海,上海中医药大学肝病研究所、上海市曙光医院,
【出 处】
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中华肝脏病杂志
【发表日期】
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2003年11期
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