【摘 要】
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针对口岸食品检验中沙门氏菌传统检测法时间长的缺点,建立快速简便的荧光重组酶介导等温扩增法（recombinase-aided amplification, RAA）,以适应口岸快速通关的实际需求。根据沙门氏菌inv A基因保守区设计特异性引物、探针,通过引物两两组合结合探针筛选出扩增效率及灵敏度最佳的引物组合,优化反应温度及引物探针浓度,确定最佳反应条件。将建立的荧光RAA法应用于食品基质及实际样
【机 构】
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上海海关动植物与食品检验检疫技术中心
【基金项目】
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上海市科技兴农项目（2019-02-08-00-10-F01149）； 上海市自然科学基金（19ZR1417400）； 上海市科委农业科技领域项目（21N31900300）；
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针对口岸食品检验中沙门氏菌传统检测法时间长的缺点,建立快速简便的荧光重组酶介导等温扩增法（recombinase-aided amplification, RAA）,以适应口岸快速通关的实际需求。根据沙门氏菌inv A基因保守区设计特异性引物、探针,通过引物两两组合结合探针筛选出扩增效率及灵敏度最佳的引物组合,优化反应温度及引物探针浓度,确定最佳反应条件。将建立的荧光RAA法应用于食品基质及实际样品检测中,同时与GB 4789.4—2016进行比对验证。结果表明,沙门氏菌荧光RAA最佳反应温度为39℃,最佳引物、探针终浓度分别为200 nmol/L和400 nmol/L。建立的荧光RAA法特异性强,纯菌灵敏度达到3 CFU/mL,基质增菌前灵敏度为3×103 CFU/mL。TTB增菌只需2 h,即可达到3×10-2 CFU/mL,高于传统培养法的3 CFU/mL。实际样品检测结果与国标法吻合。荧光RAA法只需5 min即可观察结果, 20～30 min扩增效果最佳。相比于其他分子生物学方法,简便、快速、无需大型仪器,充分满足口岸或其他场所进行食源性微生物快速检测与监控。
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