【摘 要】
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目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及myocardin在其转分化过程中的作用.方法经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞黏附分子1做免疫分选标记)纯化分离
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目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及myocardin在其转分化过程中的作用.方法经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞黏附分子1做免疫分选标记)纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,用RNA干扰(RNAi)技术构建psimyocardin RNA表达载体抑制myocardin基因的表达.细胞分为常氧组(含21%O2,5%CO2和74%N2)、低氧组(含1%O2,5%CO2,94%N2)、常氧+myocardin抑制组和低氧+myocardin抑制组,分别培养1 d、4 d和7 d.用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测myocardin mRNA的表达;免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌(α-SM)肌动蛋白的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化.结果(1)免疫荧光检测PAEC中α-SM-肌动蛋白阳性率在低氧4 d组(0.96‰±0.08‰)明显低于7 d组(2.07‰±0.06‰,P＜0.01),阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1 d组均未见α-SM-肌动蛋白的阳性表达;(2)RT-PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧4 d组(0.14±0.01)明显低于低氧7 d组(0.23±0.03,P＜0.01),常氧组和低氧1 d组均未检测出其表达.(3)RNAi沉默myocardin基因表达后,其mRNA水平明显低于对应的低氧4 d组(0.03±0.02)和低氧7 d组(0.05±0.01,P＜0.01);平滑肌样细胞的转分化率也明显降低(0.19‰±0.07‰,0.21‰±0.04‰,P＜0.01).以上每组重复3次.结论PAEC中存在少数细胞具有转分化为平滑肌样细胞的潜能,低氧可明显促进其转分化,myocardin在此转分化过程中起重要作用.
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