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以从日本引进的苹果新品种斗南为试验材料，根据保守氨基酸序列“FTQQYQ”和“anti-1／WIPNV”设计苹果自交不亲和基因引物，P1：5’-TTTACGCAGCAATATCAG-3’；P2：5’-ACGTTCGGCCAAAT^A／C ATT-3＇。利用PCR-RFLP分析和目的片段测序方法得到了一个新的苹果自交不亲和基因-S33,其片段长度为348bp，包括P1、C2区和HV（含147bp的Intron）区。