【摘 要】
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MDA5作为RLRs蛋白家族成员,能特异性的识别较长的双链RNA,激活体内的信号通路,促进Ⅰ型干扰素的表达,在天然免疫系统中发挥着重要作用.本研究利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠MDA5
【机 构】
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新疆农业大学 动物医学学院,乌鲁木齐830000;中国农业科学院 哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室,哈尔滨150069;中国农业科学院 哈尔滨兽医研究所兽
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MDA5作为RLRs蛋白家族成员,能特异性的识别较长的双链RNA,激活体内的信号通路,促进Ⅰ型干扰素的表达,在天然免疫系统中发挥着重要作用.本研究利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠MDA5基因第一外显子区域选择一段序列作为靶序列,将含有靶序列的sgRNA和Cas9质粒的体外转录产物显微注射至C57BL/6近交系小鼠的受精卵中,8只F0代首建鼠中5号小鼠为MDA5基因敲除纯合小鼠;将其与野生型(WT)小鼠合笼繁育出MDA5+/-小鼠,再通过全同胞合笼交配的方式获得纯合子小鼠.基因组PCR后检测显示F2代小鼠中有4只纯合小鼠,进一步RT-PCR结果显示MDA5敲除小鼠各脏器中MDA5基因均未表达,表明基于CRISPR/Cas9技术的MDA5基因敲除小鼠模型构建成功.为进一步研究MDA5在天然免疫应答机制和抗病毒感染等方面提供有价值的模型.
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