【摘 要】
：
本研究旨在以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,构建一株同时表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株GP5蛋白和猪瘟病毒（CSFV）E2蛋白的重组腺病毒疫苗。首先利用重叠PCR将GP5和E2基
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室,内蒙古农业大学动物科学与医学学院
【基金项目】
：
国家863计划（2006AA10A204）
论文部分内容阅读
本研究旨在以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,构建一株同时表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株GP5蛋白和猪瘟病毒（CSFV）E2蛋白的重组腺病毒疫苗。首先利用重叠PCR将GP5和E2基因通过口蹄疫病毒（FMDV）2A序列连接,形成一个完整的ORF,并将其克隆到腺病毒穿梭载体中,通过细菌内同源重组构建共表达PRRSVGP5蛋白和CSFVE2蛋白的重组腺病毒（rAdV-GP52AE2）。间接免疫荧光试验和western blot检测证实2个外源基因均获得表达。在小鼠上进行的免疫效力评价结果显示,rAd
其他文献
用PCR法扩增猪圆环病毒1型（PCV1）全长基因组，将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基，在病毒基因组内插入SalI酶切位点作为分子靶标
为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因和猪圆环病毒2(PCV2)ORF2双基因共表达重组腺病毒。将扩增的PRRSV GP5基因和PCV2 ORF2基因通过IRES元件串联,构建重组腺病毒穿梭质粒。PmeⅠ酶切线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,同源重组后筛选重组腺病毒质粒,经PacⅠ酶切后转染293A细胞进行包装,获得重组腺病毒。PCR
以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板，应用PCR扩增获得MPB83基因，克隆后，亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中，构建的重组穿梭质粒pShuttle—CMV—MPB83经PineⅠ酶切，转化含
为重组表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）M蛋白,本研究将RT-PCR获得的PRRSV CH-1a株M蛋白基因,克隆于pMD18-T载体中,经测序鉴定正确后,亚克隆至牛痘病毒重组转移质粒pSC11中,
利用DNA重组技术将猪瘟病毒石门株囊膜蛋白E2基因定向插入逆转录病毒载体pBABE-puro中，构建重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2。将pBABE-puro-E2和辅助质粒pVSV-G经磷酸钙共沉
为了建立马耳他布氏杆菌M5—90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断，本研究以bp26基因作为重组靶位点，以M5—90为亲本，利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列，将卡那霉素抗性基因（Kan^r
2009年2月～6月我国某奶牛场发生严重的犊牛多发性关节炎，发病犊牛的症状与最早发生于澳大利亚的犊牛Leachii支原体关节炎非常相似为确定病原，我们无菌采集2份具有典型症状犊牛的
为确定狂犬病病毒（RV）Flury-LEP株外源基因的插入位点及其中和抗体快速检测方法,本研究在建立了RVFlury-LEP株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的重
冀东北地区指河北省的东北部地区，总面积占全省的20％左右，森林覆盖率达到48％。拥有各类干鲜果树14．2万hm^2，年产果品5．5亿kg，林业产业产值47．6亿元；地处燕山北陆，是华北平原向内蒙古高原
种子是特殊农业生产资料，大力推广良种是加快种植业结构调整、优化生产布局、推进农业产业化进程的有效手段。近几年来，种子生产经营市场亦出现了一些新情况新问题，如何更好地抓