【摘 要】
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目的:明确WNT7b在恶性黑素瘤发生、发展中的作用,探索其促进恶性黑素瘤细胞发生侵袭转移的机制.方法:通过qRT-PCR及Western blot检测人源黑素瘤细胞系中WNT7b的表达情况,挑选WNT7b高表达细胞系A375,瞬时转染小干扰RNA敲低WNT7b的表达.采用流式细胞仪分析细胞周期,划痕实验、Transwell实验观察敲低WNT7b对A375细胞系增殖、迁移和侵袭功能的影响.通过Western blot检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EM
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院皮肤科,江苏南京210029;南京大学附属鼓楼医院皮肤科,江苏南京210008
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目的:明确WNT7b在恶性黑素瘤发生、发展中的作用,探索其促进恶性黑素瘤细胞发生侵袭转移的机制.方法:通过qRT-PCR及Western blot检测人源黑素瘤细胞系中WNT7b的表达情况,挑选WNT7b高表达细胞系A375,瞬时转染小干扰RNA敲低WNT7b的表达.采用流式细胞仪分析细胞周期,划痕实验、Transwell实验观察敲低WNT7b对A375细胞系增殖、迁移和侵袭功能的影响.通过Western blot检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)关键标志物及与黑素瘤发生发展密切相关的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)家族成员的表达.结果:WNT7b在人恶性黑素瘤细胞系A375、SK-MEL-28、A875中均有表达,A375的WNT76较其他细胞系表达量更高;敲低WNT7b使A375细胞生长阻滞于G1期,同时细胞迁移与侵袭能力受到抑制.检测EMT相关蛋白,发现E-cadherin表达上调,N-cadherin和Vimentin表达下调.进一步检测MMP家族成员的表达,发现MMP-2、MMP-7与MMP-9降低.结论:WNT7b在人源黑素瘤细胞中可能通过抑制MMP的表达,诱导EMT的发生,从而促进黑素瘤细胞的迁移与侵袭.
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