【摘 要】
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目的 通过检测神经生长因子(NGF)定向诱导神经干细胞(NSC)分化为胆碱能神经元过程中Neurod、Hes1基因的表达变化,探讨NSC的定向诱导分化机制.方法 Wistar大鼠海马形成原代克
【机 构】
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154002,佳木斯大学附属第二医院神经内科
【基金项目】
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黑龙江省教育厅科学技术研究项目;
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目的 通过检测神经生长因子(NGF)定向诱导神经干细胞(NSC)分化为胆碱能神经元过程中Neurod、Hes1基因的表达变化,探讨NSC的定向诱导分化机制.方法 Wistar大鼠海马形成原代克隆球后传代第3代检测.应用不同浓度(5,10,50,100 μg/L)的NGF对NSC进行诱导分化.免疫荧光检测胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达.实时定量聚合酶链反应(PCR)分析NSC诱导分化1周时Neurod、Hes1基因的表达变化.结果 培养获稳定状态的NSC,并具有多向分化能力.NSC经不同浓度的NGF诱导1周后,免疫荧光检测ChAT阳性率最高25％,50 μg/L NGF具最显著的诱导作用.实时定量PCR技术检测50 μg/L组NeuroD mRNA的达量最高[(1.010±0.024)]；高于其他各低浓度组[5μg/L(0.130 ±0.013),10 μg/L(0.510±0.016)],差异有统计学意义(P＜0.01)；Hes1 mRNA的表达量在50 μg/L组最低[(0.080±0.010)],低于各低浓度组[5 μg/L(0.220 ±0.014),10μg/L(0.130±0.012)],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ①在体外环境下 NGF具有较强的诱导NSC向胆碱能神经元分化的作用.②Neurod和Hes1基因的表达变化与NGF诱导NSC向胆碱能神经元的分化过程密切相关,改变bHLH正负调控基因的表达的平衡点可能对NSC分化为胆碱能神经元有重要调控作用.
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