论文部分内容阅读
目的 探讨 miR-206在大鼠肺动脉高压（ pulmonary hypertension，PH）模型中的表达和意义。方法 构建肺动脉高压大鼠模型，按缺氧暴露时间分别标记为 (1、7、14、21、28 d)组，并将常压常氧（ FIO2为 0.21）作为对照组（ n = 5），提取大鼠右下肺叶组织及外周血，实时定量 PCR检测 miR-206表达；分离大鼠原代 PASMC，以 miR-206 mimics转染细胞并进行缺氧暴露，检测细胞增殖能力。生物信息学分析发现并选择缺氧诱导因子 -1α（hypoxia-inducible factor -1α，HIF-1α）作为 miR-206的候选靶基因，以双荧光素酶报告实验验证 miR-206是否可直接调控 HIF-1α，共转染 miR-206mimics与 HIF-1α过表达质粒，检测肺动脉平滑肌细胞（ pulmonary arterial smooth muscle cell，PASMC）细胞增殖能力变化。结果 与对照组相比，大鼠肺组织中 miR-206的表达在缺氧暴露后即可出现 miR-206表达降低（ P < 0.05），大鼠血清 miR-206亦明显降低（ P < 0.05）；缺氧暴露后的大鼠肺组织分离培养的 PASMC miR-206表达与对照组相比也明显降低（ P < 0.05）， miR-206低表达时 PASMC增殖能力明显增加（ P <0.05）； miR-206 mimics转染可拮抗因缺氧暴露引起的 PASMC增殖能力增加（ P < 0.05）。生物信息学发现 HIF-1α的 3’非编码区（ 3’ untranslated region，3’UTR）具有 miR-206的结合位点，用 miR-206和 HIF-1α（野生型 3’UTR）共转染的 PASMC中荧光素酶报告基因活性较对照组显著下调（ P < 0.05），而 miR-206 mimics和 HIF-1α（突变型 3’UTR）共转染组则较对照组无明显统计学差异。共转染 miR-206 mimics后， HIF-1α上调引起的细胞增殖被逆转（P < 0.05）。结论 缺氧诱导的 miR-206下调通过靶向 PASMC中的 HIF-1α途径来促进 PH，miR-206可能是缺氧诱导 PH早期的触发因素。