山柰酚诱导人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素凋亡的研究

来源 :中国临床药理学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gdp1959
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目的 研究山柰酚对人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素(ADR)的增殖与凋亡的作用机制.方法(1)将人乳腺细胞MCF-7分为2组:空白组(培养基)和实验组.实验组分别用含不同浓度的山柰酚(20,50,100,150,200,300,400,500μmol·L-1)的培养基干预.干预48 h后,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率.(2)将MCF-7/ADR细胞分为3组:ADR组(ADR 0.1μmol·L-1)和低、中2个浓度山柰酚联合组(ADR 0.1μmol·L-1+分别加山柰酚20,50μmol·L-1),MTT法测定细胞存活率,计算半抑制浓度(IC50).(3)将MCF-7/ADR细胞分为8组:空白组(培养基)、ADR组(ADR 0.1μmol·L-1)、低、中、高3个浓度的山柰酚组(山柰酚:20,50,100μmol·L-1)和低、中、高3个联合组(ADR 0.1μmol·L-1+分别加山柰酚20,50,100μmol·L-1).干预后,流式细胞术检测细胞凋亡率.(4)将细胞分为2组:MCF-7组与MCF-7/ADR组;再将MCF-7/ADR细胞分为4组:空白组合低、中、高3个浓度山柰酚组(山柰酚:20,50,100μmol·L-1).干预后,蛋白质印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达水平(灰度值比值).结果(1)根据细胞存活率选择低、中、高3个浓度(20,50,100μmol·L-1)的山柰酚进行以下实验.(2)ADR组和低、中2个浓度山柰酚联合组的IC50分别为(43.68±0.71),(17.68±3.14)和(23.51±0.07)μmol·L-1.低、中2个浓度山柰酚联合组与ADR组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01).(3)空白组、ADR组、3个浓度(由低到高)的山柰酚组和低、中、高3个联合组的细胞凋亡率分别为(0.17±0.24)%,(23.00±1.14)%,(9.53±1.24)%,(17.07±1.04)%,(22.20±1.15)%,(16.03±1.74)%,(21.43±2.21)%和(21.93±3.57)%.ADR组、山柰酚组和联合组与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01),低剂量联合组与ADR相比,差异有统计学意义(P<0.05).(4)MCF-7组与MCF-7/ADR组的Bcl-2蛋白表达分别为1.47±0.33和0.56±0.20,这2组的Caspase-9蛋白表达分别为0.89±0.67和4.12±1.25.2组相比,上述蛋白表达的差异均有统计学意义(P<0.05).空白组和低、中、高3个浓度山柰酚组的Bcl-2蛋白表达分别为1.30±0.19,1.20±0.05,1.45±0.15和0.81±0.16;这4组的Caspase-9蛋白表达分别为1.02±0.09,0.96±0.07,0.79±0.07和0.40±0.18.高剂量组与空白组相比,上述2种蛋白表达的差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01).结论 山柰酚对MCF-7细胞有毒性作用,与ADR联合用药后降低ADR在MCF-7/ADR中的IC50,山奈酚提高MCF-7/ADR细胞的凋亡,可能与降低Bcl-2蛋白表达与升高Caspase-9蛋白表达有关.
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