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在原核细胞中表达并纯化HIV相关脑病(HIV-associated dementia，HAD)患者基底核(basal ganglia，BG)来源HIV-1 Tat蛋白，研究其对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)活性的影响。
方法以本室保存的重组质粒pGEX-KG-tat为模板扩增tat，构建重组表达载体pET-32a-tat。转化BL21(DE3)并用IPTG诱导表达Tat蛋白。Tat蛋白经镍亲和层析柱和凝胶过滤预装柱纯化、SDS-PAGE和Western blot(WB)鉴定后浓缩，测定BCA蛋白浓度，cck-8检测不同浓度Tat对HUVECs活性的影响。
结果在BL21大肠杆菌中表达、纯化得到了纯度较高的Tat蛋白，BCA测定浓度为0.47 mg/ml。随着Tat浓度的增加，HUVECs活性逐渐降低，与阴性对照组相比，100 ng/ml、200 ng/ml两组细胞活性差异均无统计学意义(P>0.05)，300 ng/ml、400 ng/ml、500 ng/ml、1 000 ng/ml四组细胞活性差异均有统计学意义(P<0.05)，但四组组间差异无统计学意义(P>0.05)。
结论在原核细胞中高效表达了具有生物学活性的HIV-1 Tat蛋白，浓度达到300 ng/ml可显著降低HUVECs的活性。