【摘 要】
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目的克隆颗粒酶B(GraB),构建GraB的原核表达载体,从而建立其原核表达体系,获得高效表达的重组GraB. 方法抽提人外周血淋巴细胞总RNA,进行RT-PCR克隆GraB cDNA,构建GraB原核表
【机 构】
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第一军医大学南方医院消化病研究所,第一军医大学细胞生物教研室,西藏军区直属门诊部
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目的克隆颗粒酶B(GraB),构建GraB的原核表达载体,从而建立其原核表达体系,获得高效表达的重组GraB. 方法抽提人外周血淋巴细胞总RNA,进行RT-PCR克隆GraB cDNA,构建GraB原核表达载体,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物. 表达产物亲和层析纯化并用免疫印迹法鉴定,以GraB底物测定其活性. 结果表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中,具有良好的抗原性和特异性,并能作用于Gr
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