目的 探讨在BALB/c小鼠感染日本血吸虫后形成肝纤维化的过程中,转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)1及其两类受体:TGF-β受体Ⅰ(TβR Ⅰ)、TGF-β受体Ⅱ(TβRⅡ)以及Smad2、Smad3、Smad4和Smad7在转录水平的表达. 方法 50只BALB/c小鼠感染日本血吸虫尾蚴,(20±1)条/只,用于构建肝纤维化模型,10只未感染的BALB/c小鼠作为健康对照组,分别在感染后8、12、16和24周处死小鼠取肝组织,同时取对照组小鼠肝组织.所获肝组织一部分立即液氮冷冻后,保存于-80℃,通过RT-PCR方法测定TGF-β1、TβR Ⅰ、TβRⅡ和Smad2、Smad3、Smad4以及Smad7的mRNA水平,结果为相对值,以待测mRNA密度扫描计数与内参照β-actin mRNA密度扫描计数的比值表示.另一部分肝组织置入常规10％甲醛固定液中,用于伊红-苏木素(HE)染色和天狼猩红染色,其中HE染色用于测定血吸虫虫卵肉芽肿面积(每一个虫卵肉芽肿的最大长度与最大宽度的乘积,以mm2表示),每份标本随机测量5个虫卵肉芽肿面积,求平均值,天狼猩红染色用于判断肝纤维化程度,并以下述方法计分:正常肝组织为0级,以20=1计分;胶原纤维包绕肉芽肿周围并插入其中为Ⅰ级,以21=2计分；汇管区有大量纤维化,小叶间仅有少量纤维为Ⅱ级,以22=4计分;纤维组织大量延伸至小叶间为Ⅲ级,以23=8计分. 结果 小鼠感染日本血吸虫8周后其肝脏中形成的虫卵肉芽肿周围出现胶原纤维,并随着感染时间的延长,胶原纤维逐渐增加.感染后16周,胶原纤维在肝小叶中分布明显,其肝纤维化程度计分为4.27±1.03分;至感染24周时,胶原沉积量达到顶峰,为6.90±1.57分；而正常小鼠肝组织的肝纤维化计分为1分.正常小鼠肝脏中TGF-β1 mRNA的表达水平为0.30±0.18,其表达量在感染后8周达到高峰(0.87±0.76),而后下降,但在感染24周时,其表达量再次升高(1.34±0.52).TβRⅡmRNA在感染8周时有所下降,为0.60±0.30,在感染12周时回升到正常水平,为0.92±0.21,在感染16周时,其表达量又下降为0.76±0.16,而在感染24周时升至1.16±0.73;而正常小鼠肝组织中TβRⅡmRNA的表达水平为1.16±0.25.感染后,Smad2 mRNA在感染12周时和感染24周时均较正常对照(0.85±0.10)有所下降,分别为0.41±0.23和0.50±0.16.Smad3 mRNA在感染16周时有所升高(0.62±0.09),这种高水平表达持续到24周(0.61±0.14).在肝纤维化形成过程中,Smad4 mRNA和Smad7 mRNA以及TβRⅠ mRNA的表达水平与正常对照组比较无明显差异. 结论 在日本血吸虫性肝纤维化形成过程中,下述因子的下调可能诱导肝纤维化形成;TβRⅡmRNA、Smad3 mRNA和处于感染后期的Smad2 mRNA,而Smad7mRNA的正常水平表达在肝纤维化形成中发挥促进作用.在感染早期,Smad2 mRNA表达的下调可能抑制肝纤维化的形成。
TGF-β1-Smads信号传导通路在感染日本血吸虫小鼠肝纤维化中的表达
【摘 要】
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目的 探讨在BALB/c小鼠感染日本血吸虫后形成肝纤维化的过程中,转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)1及其两类受体:TGF-β受体Ⅰ(TβR Ⅰ)、TGF-β受体Ⅱ(TβRⅡ)以及Smad2、Smad3、Smad4和Smad7在转录水平的表达. 方法 50只BALB/c小鼠感染日本血吸虫尾蚴,(20±1)条/只,用于构建肝纤维化模型,10只未感染
【机 构】
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150001哈尔滨,黑龙江省医院消化病院消化一科,310003杭州,浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所,310003杭州,解放军杭州疗养院
【出 处】
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国际医学寄生虫病杂志
【发表日期】
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2013年40期
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