小鼠Akt基因真核表达载体的构建及鉴定

• 作 者: 蒲静 俞晓丽 马会明 李昕 王蒙蒙
• 机 构: 宁夏医科大学生育力保持教育部中心实验室
• 出 处: 宁夏医学杂志
• 发表日期: 2018年7期
• 关键词: 真核表达载体 构建 转染

目的构建含有小鼠Akt基因以及绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pDoubleEx-EGFPAkt1。方法以小鼠卵巢RNA为模板,通过RT-PCR扩增Akt,并将其克隆到pDoubleEx-EGFP载体中。通过酶切和测序鉴定,构建真核表达载体pDoubleEx-EGFP-Akt1。之后转染人卵巢癌上皮细胞SKOV-3。结果经测序鉴定,构建的Akt基因序列与野生型Akt序列完全相符。将pDoubleEx-EGFP-Akt1转染进入人卵巢癌上皮细胞SKOV-3,观察到稳定转染后的细胞有明显绿色荧光蛋白表达。结