【摘 要】
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目的构建SKP2突变载体SKP2S72A和SKP2S72D并验证其生物学功能。方法利用一步法PCR合成含有SKP2S72A和SKP2S72D突变序列,通过酶切连接将序列插入p Babe载体中,将克隆载体转入
【机 构】
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陕西中医药大学基础医学院生物学教研室
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目的构建SKP2突变载体SKP2S72A和SKP2S72D并验证其生物学功能。方法利用一步法PCR合成含有SKP2S72A和SKP2S72D突变序列,通过酶切连接将序列插入p Babe载体中,将克隆载体转入大肠杆菌后,筛选阳性克隆进行序列测定,将鉴定正确的克隆转染HEK293细胞,并利用Western blot实验鉴定基因表达及其对靶蛋白P27的影响。结果PCR扩增得到序列测定结果与预期序列完全一致;构建的SKP2S72A和SKP2S72D突变质粒,用于基因转染纯度较好,在真核细胞中成功表达,并且影响了P
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