牛Nanog基因克隆及其在皮肤成纤维细胞中的表达

• 作 者: 郑喜邦 云彦 胡勇策 李勇 王华岩 窦忠英
• 机 构: 西北农林科技大学国家干细胞生物技术中心陕西分中心,广西大学动物科技学院,宁夏大学生命科学学院
• 出 处: 畜牧兽医学报
• 发表日期: 2008年5期
• 关键词: 牛 Nanog 分子克隆 真核表达
• 基金项目: 科技部“863”项目(2005AA219050);教育部重大项目(03160);陕西省重点项目(2006kz05-G1)资助

本研究克隆了牛Nanog基因，构建其真核表达载体，并转染皮肤成纤维细胞，获得能够用作核移植供核细胞的稳定转染细胞株。从6周龄的胎牛原始生殖嵴中提取总RNA，通过RT—PCR扩增Nanog基因，将其克隆到pMD-18T载体，再从酶切鉴定和测序正确的质粒上切下目的片段，定向克隆到pCDNA3-FLAG表达载体上，挑选序列正确的真核表达质粒pCDNA3-Nanog转染牛皮肤成纤维细胞，获得了稳定转染的细胞株。用RT—PCR和Western Blotting分别检测NanogmRNA和FLAG-Nanog融合蛋白