高尔基体蛋白73在肝细胞癌转移及侵袭中的作用

• 作 者: 刘丽萍 陈健康 刘元明 张丹浩 张景 杨晓莉
• 机 构: 100039 北京，武警总医院检验科,100039 北京，武警总医院检验科,100039 北京，武警总医院检验科,100039 北京，武警总医院检验科,100039 北京，武警总医院检验科,10003
• 出 处: 中华肿瘤杂志
• 发表日期: 2017年39期
• 关键词: 肝肿瘤 小鼠 高尔基体蛋白73 肿瘤转移

目的

探讨高尔基体蛋白73(GP73)在肝癌细胞增殖、转移和小鼠肿瘤形成中的作用。

方法

应用pX459－GP73－sgRNA重组质粒转染HepG2和H22肝癌细胞，通过筛选获得敲除GP73的细胞株。采用Western blot检测GP73在HepG2和H22细胞中的表达，采用平板克隆形成实验检测GP73对细胞生长能力的影响，采用流式细胞仪检测G₂/M期细胞比例，采用Transwell实验检测GP73对细胞侵袭能力的影响，采用皮下种植实验检测GP73对H22细胞肿瘤形成能力的影响。

结果

经嘌呤霉素筛选获得稳定敲除GP73蛋白的H22和HepG2细胞。GP73敲除10 d后，HepG2细胞GP73－sgRNA转染组的细胞克隆数[(400±70)个]少于阴性对照组[(980±40)个]；H22细胞GP73－sgRNA转染组的细胞克隆数[(248±60)个]少于阴性对照组[(1 100±50)个]，差异均有统计学意义(均P<0.01)。敲除GP73蛋白后，细胞周期进程减慢。Transwell迁移实验中，HepG2细胞GP73－sgRNA转染组和阴性对照组的穿膜细胞数分别为(312±50)个和(1 540±87)个；H22细胞GP73－sgRNA转染组和阴性对照组的穿膜细胞数分别为(305±49)个和(1 270±86)个，差异均有统计学意义(均P<0.01)。侵袭实验中，HepG2细胞GP73－sgRNA转染组和阴性对照组的穿膜细胞数分别为(230±47)个和(648±74)个；H22细胞GP73－sgRNA转染组和阴性对照组的穿膜细胞数分别为(238±54)个和(596±63)个，差异均有统计学意义(均P<0.01)。GP73敲除后，小鼠的肿瘤体积为(570±170)mm³，小于对照组[(1 200±110)mm³，P<0.01]。

结论

敲除GP73蛋白能减弱H22和HepG2肝癌细胞的侵袭和迁移能力，GP73的表达可能与肿瘤侵袭、增殖和转移有关。