探针药物法测定CYP450 3A的活性

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目的:以睾酮为探针药物采用高效液相色谱法测定GYP4503A的活性。方法:采用大鼠肝微粒体体外代谢模型,以有机溶剂乙腈终止反应并沉淀蛋白,上清液进高效液相色谱分析。根据Lineweaver-Burk双倒数作图法方程式计算酶动力学参数。结果:在蛋白浓度为1.0mg·mL^-1,反应时间为5min时酶促反应近似直线进行,测得酶动力学参数Km值为38.84μmol·L^-1,Vmax值为1.83μmol·L^-1·min^-1·mg^-1 protein。结论:
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