凝血因子Ⅷ C2结构域表达载体的构建及其在真核细胞NIH3T3中的表达

• 作 者: 刘晓冬 马淑梅 LANG Glen SEHON Alec
• 机 构: 吉林大学公共卫生学院,卫生部放射生物学重点实验室,吉林,长春,130021加拿大曼尼拖巴大学医学院免疫系,加拿大,温尼伯,R3E,0W3
• 出 处: 吉林大学学报（医学版）
• 发表日期: 2005年1期
• 关键词: 因子Ⅷ C2结构域 逆转录聚合酶链反应 基因重组

目的:构建人凝血因子FⅧ中具有免疫活性的C2结构域表达载体并通过真核宿主细胞表达出多肽.方法:从HEK293细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增获得目的片段.将该片段与信号肽共同构建在同一表达载体,并在NIH3T3细胞中表达,Western blotting检测.结果:经限制性酶切鉴定和测序分析证实,采用RT-PCR成功地完成FⅧ-C2 cDNA的扩增和表达载体的构建,重组载体转染进入NIH3T3细胞后,经检测培养上清中的蛋白成分证实,成功地表达出FⅧ-C2结构域多肽.结论:重组表达载体的构建是表达出分泌型FⅧC2多肽的一种可行的方法.