【摘 要】
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小麦赤霉病是全球性病害,严重威胁着中国的小麦粮食安全.目前已经明确的抗赤霉病位点有7个(Fhb1～Fhb7).其中Fhb1位点是3BS染色体上稳定性和效应最大的抗扩展位点.TaPFT是Fhb1位点上的抗性基因之一,但其抗性机理并不清楚.本研究以TaFRK为诱饵蛋白通过酵母双杂交技术筛选小麦酵母双杂交文库,从而得到互作基因TaFRK,其编码蛋白为果糖激酶.进一步通过构建酵母双杂交载体和双分子荧光互补载体分析TaFRK与TaPFT之间的互作关系,并通过qPCR分析TaFRK受到禾谷镰刀菌孢子诱导后的表达模式.
【机 构】
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河南科技学院生命科技学院/河南省植物遗传改良与土壤修复国际联合实验室,河南新乡453000
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小麦赤霉病是全球性病害,严重威胁着中国的小麦粮食安全.目前已经明确的抗赤霉病位点有7个(Fhb1～Fhb7).其中Fhb1位点是3BS染色体上稳定性和效应最大的抗扩展位点.TaPFT是Fhb1位点上的抗性基因之一,但其抗性机理并不清楚.本研究以TaFRK为诱饵蛋白通过酵母双杂交技术筛选小麦酵母双杂交文库,从而得到互作基因TaFRK,其编码蛋白为果糖激酶.进一步通过构建酵母双杂交载体和双分子荧光互补载体分析TaFRK与TaPFT之间的互作关系,并通过qPCR分析TaFRK受到禾谷镰刀菌孢子诱导后的表达模式.通过酵母双杂交试验发现,共转pGBKT7-TaPFT和pGADT7-TaFRK的酵母菌株Y2 HGlod在含有X-α-Gal和金担子素A(Aureobasidin A,AbA)的四缺培养基SD/-His-Leu-Trp-Ade上长出蓝色菌落,证明TaFRK与TaPF7在酵母中互作.通过双分子荧光互补试验发现,在共转YN-TaPFT和YC-TaFRK表达载体的烟草叶片中可观察到强烈的黄色荧光信号,表明TaFRK与TaPFT在植物细胞中能够发生相互作用.实时荧光定量PCR分析发现,禾谷镰刀菌孢子侵染抗性小麦后,TaFRK基因表达量升高,说明TaFRK基因的表达受禾谷镰刀菌侵染诱导.本研究结果对进一步研究TaPFT的赤霉病抗性机制具有一定的参考价值.
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