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目的构建对人乙酰肝素酶（hpa）基因有特异性抑制作用的短发夹RNA（shRNA）表达载体。方法根据GenBank数据库提供的hpa基因核苷酸序列,按照shRNA设计原则设计5对特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中,酶切鉴定和测序验证阳性克隆。结果经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功。结论成功构建了5个靶向人hpa的shRNA表达载体,为进一步研究该载体转染MDA-MB-231细胞后对hpa基因的沉默效果奠定基础。