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【摘 要】 目的 分析分子生物学方法荧光定量PCR（FQ-PCR）在痰结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法 回顾性分析306例确诊肺结核患者和108例非结核病患者临床资料，结核患者按照不同检查方式分为三组（306例），将萋-尼氏法抗酸菌染色涂片检查方法设为实验A组；将分枝杆菌快速液体培养法检查方法设为实验B组；将FQ-PCR检查方法设为研究组，对比三组检测结果；收集同期临床108例确诊为非结核病患者痰标本行以上三项检查，分别设为对照A组、对照B组和研究对照组，对比分析三组检测结果。 结果 实验B组与研究组痰分枝杆菌检出率均显著高于实验A组；对照A组与研究对照组检测特异性均显著高于对照B组，且高于对照A组，均具统计学意义（P<0.05）。结论 FQ-PCR检测痰结核分枝杆菌DNA具积极应用价值，检测灵敏度和特异性均较高，操作简捷，可作为结核病临床常规检测方案。
【关键词】 荧光定量PCR 痰结核分枝杆菌DNA 检测 价值
结核病是发展中国家流行的一种致死性疾病，现已成为世界严重公共卫生问题。有研究表明，结核病的延迟诊断给患者及亲密接触者造成严重不良后果，因此，临床早期明确诊断具有重要意义[1，2]。由于痰样本采取较简单、易得，是一种常用的检测样本。故本研究中通过采用三种不同检查方式检测本院306例结核病患者的痰结核分枝杆菌，旨在为该疾病患者临床检查探讨最佳实验室检查方案，现将研究结果报告如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
回顾性分析2014年4月-2015年4月本院诊治的306例结核患者临床资料，依据临床表现及影像学等检查确诊为肺结核病患者[3]。按照不同检查方式分为实验A组、实验B组和研究组；本组患者男女比例189：117，年龄20-75岁，平均（49.36±2.21）岁，临床主要症状表现：盗汗、低热、体重下降、呼吸道感染等；同时收集同期临床108例非结核病患者痰标本，按照不同检查方式分为对照A组、对照B组和研究对照组。
1.2 方法
1.2.1 采集痰标本
采取清晨患者深部咳痰3口分别装入3个无菌标本盒内，标记送检。
1.2.2 检查方法
①萋-尼氏抗酸菌涂片染色法[4]；②分枝杆菌快速液体培养法：选择美国BD公司液体培养箱和试剂；③FQ-PCR法：使用ABI7500PCR仪，试剂盒为达安基因结核分枝杆菌DNA检测试剂盒。
1.3 观察指标
三组痰分枝杆菌检出率；三组检出特异性。
2 结果
2.1 三组痰分枝杆菌检出数对比
实验B组与研究组的痰分枝杆菌检出数均比实验A组高，其中研究组检出数198最高，且高于实验B组，详见表1。
表1 三组方法检测痰标本结果
2.2 三组方法检测检出率和特异性对比
实验B组与研究组检测痰分枝杆菌检出率均显著高于实验A组的26.47%，且研究组检出率64.71%显著高于实验B组的40.85%；同时，用三种方法检测108例非结核病患者痰标本发现， 研究对照组检测特异性均高于对照A组和对照B组，比较差异明显具统计学意义（P<0.05），详见表2。
3 讨论
结核病主要是由分枝杆菌引发的一种以呼吸系统为主的传染病，是目前严重威胁人类生命安全的重要性传染病[5]。临床早期检查及明确诊断利于为结核病患者建立有效治疗方案提供科学指导，从而提高临床疗效，改善结核病患者生存质量。由此可知，为结核病患者探索出临床科学、有效的检测方案是当下亟待解决的问题，具有重要研究价值。
本研究通过对比接受抗酸菌涂片染色、培养法以及FQ-PCR法检查的三组实验临床资料，结果显示PCR组的痰菌检出率及特异性均显著高于其他组，可见，FQ-PCR法检查痰结核分枝杆菌操作方法简捷、诊断快速、特异性较高，且检查结果具有较高的真实度和可靠性，表明FQ-PCR法对结核分枝杆菌的快速检测具重要意义[6]。抗酸菌涂片染色检查虽然方法简单，但是实际应用中难以达到临床需求；分枝杆菌快速液体培养法要求较高，且等待时间长，在实际应用中存在一定局限性。由此可知，FQ-PCR检查技术具有重要的推广应用价值，更容易被患者接受和使用[7-8]。
综上所述，FQ-PCR技术检测痰结核分枝杆菌具有较高阳性检出率，检测特异性较高，临床操作简捷，并且克服了其他检测方法的一些缺点，具有临床实际应用价值，是一种值得推荐和推广的实验室诊断技术，可以作为结核病常规检测方案。
参考文献
[1]梁建琴，高华方，李洪敏，等.PCR-荧光探针法检测临床痰标本结核分枝杆菌的可靠性研究[J].中国防痨杂志，2012，34（5）：271-272.
[2]何丙生，代秀萍，李双初.腺苷脱氨酶、结核抗体及DNA联合检测在结核性积液的临床诊断价值[J].武汉大学学报（医学版），2012，25（04）：544-546.
[3]王晓琴，马燕粉，李锐成，等.尿液结核分支杆菌检测方法在泌尿系结核诊断中的应用研究[J].山西医科大学学报，2013，44（8）：624-625.
[4]梁少碧.FQ-PCR和双抗原夹心胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌的对比观察[J].结核病与肺部健康杂志，2013，2（2）：112-114.
[5]阳幼荣，吴雪琼，赵卫国.三种结核分枝杆菌重组蛋白抗原血清学诊断价值的研究[J].中华临床医师杂志（电子版），2012，28（02）：382-384.
[6]胡静，袁文清.PCR技术检测体液中结核分枝杆菌的结果分析[J].国际检验医学杂志，2013，34（5）：588-589.
[7]魏建华，薛晓红，熊建军.结核分枝杆菌DNA分子生物学检测[J].预防医学情报杂志，2012，17（01）：76-78.
[8]杨长绍，王丽，潘鑫艳，等.FQ-PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌 [J].临床与实验病理学杂志，2014，30（3）：321-322.
[通讯作者]王庆，男，安徽省胸科医院检验科主任，副教授。
【关键词】 荧光定量PCR 痰结核分枝杆菌DNA 检测 价值
结核病是发展中国家流行的一种致死性疾病，现已成为世界严重公共卫生问题。有研究表明，结核病的延迟诊断给患者及亲密接触者造成严重不良后果，因此，临床早期明确诊断具有重要意义[1，2]。由于痰样本采取较简单、易得，是一种常用的检测样本。故本研究中通过采用三种不同检查方式检测本院306例结核病患者的痰结核分枝杆菌，旨在为该疾病患者临床检查探讨最佳实验室检查方案，现将研究结果报告如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
回顾性分析2014年4月-2015年4月本院诊治的306例结核患者临床资料，依据临床表现及影像学等检查确诊为肺结核病患者[3]。按照不同检查方式分为实验A组、实验B组和研究组；本组患者男女比例189：117，年龄20-75岁，平均（49.36±2.21）岁，临床主要症状表现：盗汗、低热、体重下降、呼吸道感染等；同时收集同期临床108例非结核病患者痰标本，按照不同检查方式分为对照A组、对照B组和研究对照组。
1.2 方法
1.2.1 采集痰标本
采取清晨患者深部咳痰3口分别装入3个无菌标本盒内，标记送检。
1.2.2 检查方法
①萋-尼氏抗酸菌涂片染色法[4]；②分枝杆菌快速液体培养法：选择美国BD公司液体培养箱和试剂；③FQ-PCR法：使用ABI7500PCR仪，试剂盒为达安基因结核分枝杆菌DNA检测试剂盒。
1.3 观察指标
三组痰分枝杆菌检出率；三组检出特异性。
2 结果
2.1 三组痰分枝杆菌检出数对比
实验B组与研究组的痰分枝杆菌检出数均比实验A组高，其中研究组检出数198最高，且高于实验B组，详见表1。
表1 三组方法检测痰标本结果
2.2 三组方法检测检出率和特异性对比
实验B组与研究组检测痰分枝杆菌检出率均显著高于实验A组的26.47%，且研究组检出率64.71%显著高于实验B组的40.85%；同时，用三种方法检测108例非结核病患者痰标本发现， 研究对照组检测特异性均高于对照A组和对照B组，比较差异明显具统计学意义（P<0.05），详见表2。
3 讨论
结核病主要是由分枝杆菌引发的一种以呼吸系统为主的传染病，是目前严重威胁人类生命安全的重要性传染病[5]。临床早期检查及明确诊断利于为结核病患者建立有效治疗方案提供科学指导，从而提高临床疗效，改善结核病患者生存质量。由此可知，为结核病患者探索出临床科学、有效的检测方案是当下亟待解决的问题，具有重要研究价值。
本研究通过对比接受抗酸菌涂片染色、培养法以及FQ-PCR法检查的三组实验临床资料，结果显示PCR组的痰菌检出率及特异性均显著高于其他组，可见，FQ-PCR法检查痰结核分枝杆菌操作方法简捷、诊断快速、特异性较高，且检查结果具有较高的真实度和可靠性，表明FQ-PCR法对结核分枝杆菌的快速检测具重要意义[6]。抗酸菌涂片染色检查虽然方法简单，但是实际应用中难以达到临床需求；分枝杆菌快速液体培养法要求较高，且等待时间长，在实际应用中存在一定局限性。由此可知，FQ-PCR检查技术具有重要的推广应用价值，更容易被患者接受和使用[7-8]。
综上所述，FQ-PCR技术检测痰结核分枝杆菌具有较高阳性检出率，检测特异性较高，临床操作简捷，并且克服了其他检测方法的一些缺点，具有临床实际应用价值，是一种值得推荐和推广的实验室诊断技术，可以作为结核病常规检测方案。
参考文献
[1]梁建琴，高华方，李洪敏，等.PCR-荧光探针法检测临床痰标本结核分枝杆菌的可靠性研究[J].中国防痨杂志，2012，34（5）：271-272.
[2]何丙生，代秀萍，李双初.腺苷脱氨酶、结核抗体及DNA联合检测在结核性积液的临床诊断价值[J].武汉大学学报（医学版），2012，25（04）：544-546.
[3]王晓琴，马燕粉，李锐成，等.尿液结核分支杆菌检测方法在泌尿系结核诊断中的应用研究[J].山西医科大学学报，2013，44（8）：624-625.
[4]梁少碧.FQ-PCR和双抗原夹心胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌的对比观察[J].结核病与肺部健康杂志，2013，2（2）：112-114.
[5]阳幼荣，吴雪琼，赵卫国.三种结核分枝杆菌重组蛋白抗原血清学诊断价值的研究[J].中华临床医师杂志（电子版），2012，28（02）：382-384.
[6]胡静，袁文清.PCR技术检测体液中结核分枝杆菌的结果分析[J].国际检验医学杂志，2013，34（5）：588-589.
[7]魏建华，薛晓红，熊建军.结核分枝杆菌DNA分子生物学检测[J].预防医学情报杂志，2012，17（01）：76-78.
[8]杨长绍，王丽，潘鑫艳，等.FQ-PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌 [J].临床与实验病理学杂志，2014，30（3）：321-322.
[通讯作者]王庆，男，安徽省胸科医院检验科主任，副教授。