鉴别和筛选出促进膀胱癌干细胞(bladder cancer stem cells,BCSC)自我更新的长链非编码RNA(long non–coding RNAs,lncRNAs),并进一步分析其预测膀胱癌复发的价值。
方法2012年3月至2015年1月通过悬浮球囊培养法获得膀胱癌J82球囊及食管癌KYSE150球囊,以相应的肿瘤细胞作为对照,采用基因芯片技术及在线软件(coding potential caculator,CPC)分析检测两种球囊及细胞中具有差异表达的lncRNAs,筛选出表达量最高的lncRNAs。荧光定量PCR法验证lncRNAs在球囊中的表达量。采用慢病毒shRNA技术构建稳定下调lncRNA–BCSC表达的膀胱癌J82细胞株,观察其对膀胱癌球囊形成能力的影响。选取2009年1月至2012年12月收治的104例膀胱癌患者,行经尿道膀胱肿瘤切除术(TURBT)并经病理检查确诊为膀胱癌。采用荧光定量PCR法检测膀胱癌组织和正常膀胱黏膜组织中lncRNA–BCSC的相对表达量,分析lncRNA–BCSC相对表达量与临床病理指标的相关性。
结果经悬浮球囊培养法获得膀胱癌J82球囊,经基因芯片技术鉴定出750个高表达的lncRNAs,CPC非编码转录本评分及荧光定量PCR法验证筛选出lncRNA–BCSC。稳定下调lncRNA–BCSC的J82细胞的球囊形成能力受到抑制。104例膀胱癌组织中,57例(54.8%)lncRNA–BCSC高表达。高表达的lncRNA–BCSC与膀胱癌患者TURBT术后复发率呈正相关(P=0.009)。
结论lncRNA–BCSC能够促进BCSC自我更新,lncRNA–BCSC高表达与TURBT术后膀胱癌复发率呈正相关,有望成为预测膀胱癌复发与精准治疗的分子标志物。