伪狂犬病病毒鄂A株TK~-/LacZ~+突变株的构建

• 作 者: 方六荣 周复春 陈焕春 吴斌 何启盖
• 机 构: 华中农业大学畜牧兽医学院
• 出 处: 畜牧兽医学报
• 发表日期: 2001年3期
• 关键词: 伪狂犬病病毒 鄂A株 TK-/LacZ+突变株
• 基金项目: “九五”国家科技攻关计划生物技术项目资助!(项目编号 96 -C0 1- 0 4- 0 3)

本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI／KpnI片段为探针，通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约5.9 kb的KpnI片段中含有TK基因，回收该片段并克隆于pUC18的KpnI位点。然后进一步克隆其中含TK基因的PstI／KpnI片段，并将LacZ表达盒插入到该片段中的BamHI位点，构建转移质粒pUEKPZ。将该质粒与伪狂犬病病毒鄂A株基因组共转染PK-15细胞，待完全病变后在X-gal存在下筛选蓝斑，蓝斑纯化3次后，经PCR扩增、Southern杂交证实获得的病毒为伪狂犬