论文部分内容阅读
目的 研究氟化钠(NaF)是否会诱导人肝细胞L02衰老及衰老相关标志蛋白水平的改变.方法 不同浓度(0、1、2、3、4、5、6、7和8 mmol/L)NaF处理L02人正常肝细胞,CCK-8法检测细胞存活率的变化以筛选NaF的作用浓度;衰老标志物β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-Gal)染色检测衰老阳性细胞;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)测定细胞衰老标志蛋白p16,p21 mRNA和蛋白的表达水平;流式细胞术分析细胞周期的变化情况.结果 CCK-8结果显示,NaF浓度为1、4、7 mmol/L时L02细胞的存活率(87.38 ±0.93、66.72 ±2.81、52.17 ±2.04)均低于对照组[(100.00 ±0.00),均P ＜0.01],且每组之间的细胞存活率差异存在统计学意义(均P ＜0.01),因此NaF选用1、4、7 mmol/L处理L02细胞作为低氟组、中氟组、高氟组开展研究;β-半乳糖苷酶染色结果显示,低、中、高氟组中细胞衰老率(23.15 ±0.23、36.06 ± 0.40、65.36 ±0.82)均高于正常组[(3.27 ±0.27),P＜0.01];Real-time PCR 结果显示,p16、p21 mRNA 在低、中、高氟组中表达(2.29 ±0.19、3.44 ±0.30、5.25 ±0.32;1.88±0.22、3.22±0.24、7.33±0.30)表达均高于正常对照组[(1.00±0.00;1.00±0.00),均P＜0.01].低、中、高氟组中p16蛋白水平(93.68 ±3.40、116.25 ±7.30、122.31 ± 3.00)均高于对照组[(78.07 ±4.17),P ＜0.05,P ＜0.01,P＜0.01),低、中、高氟组中p21 蛋白水平(87.61 ±5.22、121.62 ±4.27、147.95 ±7.81)均高于对照组[(61.32 ±4.56),均P＜0.01)];流式结果显示,低、中、高氟组L02细胞周期均停滞在G2期,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 NaF处理的人肝细胞L02中细胞衰老率及衰老标志蛋白p16、p21的mRNA和蛋白表达升高,这可能提示了NaF可导致L02细胞衰老,进一步说明细胞衰老在氟化物诱导的肝损伤中可能具有重要作用.