【摘 要】
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目的 探讨植物源重组人血清白蛋白能否替代传统B27细胞培养添加剂作为基础培养基分化人多潜能干细胞为心肌细胞.方法 人多潜能干细胞以1.2×l04个/cm2的细胞密度接种,汇合度
【机 构】
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首都医科大学附属北京安贞医院 心肺血管疾病研究所 北京100029
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目的 探讨植物源重组人血清白蛋白能否替代传统B27细胞培养添加剂作为基础培养基分化人多潜能干细胞为心肌细胞.方法 人多潜能干细胞以1.2×l04个/cm2的细胞密度接种,汇合度达至75％后采用含有0、50、100、200 g/L不同浓度植物源重组人血清白蛋白的分化培养基对其进行诱导分化,在光学显微镜和荧光显微镜下记录干细胞向心肌分化的全过程.用流式细胞仪检测不同浓度植物源人血清重组白蛋白心肌细胞的分化效率.用免疫荧光染色检测心肌细胞特异性标志物α-辅肌动蛋白(α-actinin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT);用电镜观察人多潜能于细胞来源心肌细胞的超显微结构以及心肌细胞对药物的反应.结果 大量的自发跳动心肌细胞在诱导分化第9d左右出现,浓度为200 g/L的重组人血清白蛋白配成的心肌分化液的分化效率达60.4％;跳动心肌细胞α-actinin和cTnT染色阳性,超显微结构有肌丝的存在,且对异丙肾上腺素和维拉帕米呈剂量依赖性.结论 利用成分明确的、无动物源性的方法在体外诱导人多潜能干细胞分化为心肌细胞,分化效率达60.4％,分化方法简单且低成本,可作为临床级别使用.
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