【摘 要】
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目的:扩增、克隆人成骨蛋白-1(human osteogenic protein-1,hOP-1)成熟肽cDNA基因,并利用大肠杆菌表达hOP-1成熟肽.方法:PCR扩增hOP-1成熟肽cDNA基因,将其克隆入受控于含有PR
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目的:扩增、克隆人成骨蛋白-1(human osteogenic protein-1,hOP-1)成熟肽cDNA基因,并利用大肠杆菌表达hOP-1成熟肽.方法:PCR扩增hOP-1成熟肽cDNA基因,将其克隆入受控于含有PRPL启动子的温控型大肠杆菌表达载体pDH,构建成的重组质粒pDOPm以大肠杆菌DH5α为宿主菌进行温度诱导表达,表达产物纯化和复性后,以小鼠肌袋模型检测诱骨活性.结果:扩增得到hOP-1成熟肽基因;含重组质粒pDOPm的工程菌经42℃诱导后在SDS-PAGE上出现一条新蛋白条带,分子量约为16ku,表达量占菌体总蛋白的21%,以包涵体形式存在,经纯化和复性处理,得到纯度高于85%、具有良好异位诱导成骨活性的hOP-1成熟肽.结论:成功克隆出hOP-1成熟肽基因,并在大肠杆菌中得到高效表达,复性后具有诱骨活性.
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