【摘 要】
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利用正交设计法对影响洋桔梗RAPD反应的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物和模板等主要因素的作用进行了比较分析,建立了洋桔梗RAPD的最佳反应体系:即在25μL反应体积中,10×
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利用正交设计法对影响洋桔梗RAPD反应的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物和模板等主要因素的作用进行了比较分析,建立了洋桔梗RAPD的最佳反应体系:即在25μL反应体积中,10×PCR buffer为2.5μL,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物浓度为0.2μmol/L,模板浓度为50 ng/μL,Taq DNA聚合酶用量为1.0 U;在此基础上,比较了不同退火温度对RAPD扩增产物的影响,退火温度经筛选选定为41℃;最后再将该反应体系应用于不同引物,结果表明该优化结果具有较好的稳定性和通用性。
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