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摘 要：目的：探讨聚醚砜滤芯对于舒血宁注射液生产过程中质量影响。方法：对过滤前后的聚醚砜滤芯进行完整性测试，细菌截留能力进行验证，对总黄酮醇苷及银杏内酯含量进行测定。结果：舒血宁注射液除菌过滤生产过程中未对聚醚砜滤芯产生侵蚀等不良影响，滤芯细菌截留能力良好，滤芯对舒血宁注射液的總黄酮醇苷及银杏内酯成分无吸附。结论：聚醚砜滤芯对舒血注射液生产质量无显著影响，可用于除菌过滤生产。
关键词：聚醚砜滤芯，舒血宁注射液，除菌过滤，质量影响
除菌过滤是无菌制剂生产工艺的关键环节，除菌过滤器在无菌制剂生产过程中起到至关重要的作用。除菌过滤器是利用细菌不能通过致密的微孔滤材的原理，采用孔径不超过 0.22微米的滤膜除去气体或者液体中的微生物。聚醚砜（PES）是一种亲水性材料，具有耐温、耐水解的特点，常用于筒式过滤器进行无菌制剂除菌过滤[1]。本研究通过探讨舒血宁注射液生产过程中使用聚醚砜滤芯进行除菌过滤后对药品质量影响，意在寻找细菌截留效果好且对药物成分影响较小的除菌过滤方式，以降低药物质量风险。
1.仪器及试药
1.1仪器
PALL完整性测试仪（颇尔过滤器北京有限公司）
CPA225D电子天平（赛多利斯公司）
Agilent1260高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器，紫外检测器（安捷伦科技有限公司）
1.2试药及材料
假单胞菌 Brevundimonas diminuta（ATCC 19146）（中国食品药品检定研究院）
甲醇为色谱纯试剂（迪马科技公司）
磷酸、四氢呋喃、丙酮、醋酸钠、乙酸乙酯、盐酸为色谱纯试剂（天津市科密欧化学试剂有限公司）
槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素對照品、银杏内酯 A 对照品、银杏内酯 B 对照品、银杏内酯 C 对照品（中国食品药品检定研究院）
试验用水为二次蒸馏的纯化水
2.方法与结果
2.1试验方法
除菌滤芯在蒸汽压力0.1MPa下121℃灭菌30min处理后，滤芯冷却后安装于过滤器上，用注射用水将滤芯充分浸湿后，取测试料液2L于40℃滤速5L/min循环过滤2h，过滤后的滤芯用5%氢氧化钠溶液浸泡5min后，用70℃注射用水冲洗30min。
2.2观察项目
2.2.1滤芯完整性测试
采用PALL完整性测试仪测定滤芯使用前后的泡点值，确认除菌滤芯完整性。测试压力 2 750 mbar，测试时间600 s，最小泡点值3400 mbar，最大压力6000 mbar。
2.2.2细菌截留实验
将适量假单胞菌溶于舒血宁注射液中制成浓度达107/cm2EFA（有效过滤面积）以上作为挑战菌溶液，取挑战菌溶液2L装入储罐中，通入压缩空气，测试菌液会依次通过测试过滤器及下游的测试膜片，循环过滤2h后，取出下游测试膜片并进行培养，观察其是否有菌落生成。
2.2.3总黄酮醇苷及银杏内酯含量
取舒血宁注射液滤前和滤后的样品三批，参照舒血宁注射液质量标准[2]中总黄酮醇苷和银杏内酯含量项下方法，分别测定槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，总黄酮醇苷含量= （槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量）×2.51。分别测定银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的含量，银杏内酯含量= （银杏内酯A含量+银杏内酯B含量+银杏内酯C含量）。
3.结果
3.1滤芯完整性测试
经测试，该型号的滤芯过滤前后泡点值均大于3 200 mbar，过滤前后滤芯完整性均符合规定。过滤前后泡点值相对偏差均未超过5%，表明舒血宁注射液除菌过滤生产过程中未对聚醚砜滤芯产生侵蚀等不良影响。详见表一。
3.2细菌截留实验
取出下游测试膜片并进行培养，逐日进行观察无菌落生长。结果表明聚醚砜滤芯细菌截留能力良好。
3.3总黄酮醇苷及银杏内酯含量
经检验，舒血宁注射液过滤前后总黄酮醇苷及银杏内酯含量无显著变化，说明过滤时聚醚砜滤芯对舒血宁注射液的总黄酮醇苷及银杏内酯成分无吸附等不良影响。详见表二。
4.讨论
舒血宁注射液主要的化学成分包括银杏酸类、内酯类和黄酮类化合物，是银杏叶经提取制成的灭菌水溶液，具有扩张血管，改善微循环的功效。在临床应用多年，疗效确切，为国家中药保护品种。然而，近年来随着中药注射剂不良反应报道的增多，舒血宁注射液的安全性问题的关注度不断提高[3-5]。
除菌过滤技术是借助过滤器材将药物溶液中细菌或杂质进行截留，从而对药物中的杂质和细菌进行有效控制，提高药物的安全性和有效性。高质量的过滤器材及全面的验证对注射剂药品质量将提供更有效的保障，从而降低药品生产中的风险[6-8]。《药品生产质量管理规范》（2010年修订）中明确规定：“与药品直接接触的生产设备表面应当平整、光洁、易清洗或消毒、耐腐蚀，不得与药品发生化学反应、吸附药品或向药品中释放物质”。本研究就与舒血宁注射液直接接触的聚醚砜滤芯对药物质量影响进行探讨，结果显示舒血宁注射液除菌过滤生产过程中未对聚醚砜滤芯产生侵蚀等不良影响，滤芯细菌截留能力良好，滤芯对舒血宁注射液的总黄酮醇苷及银杏内酯成分无吸附。聚醚砜滤芯对舒血注射液生产质量无显著影响，可用于除菌过滤生产。
有研究指出使用前和使用后对除菌过滤和成品过滤器进行完整性测试是无菌保障的一个至关重要的环节。在进行完整性测试时，需要考虑在对多芯过滤器进行起泡点测试时，总气体流量掩盖了其中某一支不完整滤芯的偏高的气体流量。总扩散流可能会掩饰了其中某支滤芯的处于临界的不完整性，导致错误的判定，不能发现不完整的过滤器[9-12]。后续研究中还需要进行相关的研究和积累，由此可见过滤工艺验证并非一次性的工作，还需根据产品质量和风险评估情况进行再验证。 参考文献
[1] 靳文静， 韩天娇， 乔龙娟. 除菌过滤器在医药领域的应用[J]. 科协论坛， 2013（10）：95-96.
[2] 赵玉欣， 高会芹， 张浩军，等. 舒血宁注射液精制工艺的优化研究[J]. 中国药物警戒， 2015， 12（9）：542-546.
[3] 林珊. 舒血宁注射液质量控制研究[D]. 福建中医药大学， 2014.
[4] 倪华丽， 马晓红. 浅談过滤器材在注射剂生产中的应用[J]. 药学研究， 2011， 30（11）：675-677.
[5] 关一鸣. 液体除菌过滤系统设计、灭菌及完整性检测[J]. 科技创新與应用， 2012（27）：19-19.
[6] 何冬雪， 张丽丽. 舒血宁注射液生产工艺规程[J]. 中国科技博览， 2012（18）：251-251.
[7] 杨薇， 谢雁鸣. 舒血宁注射液安全性研究及其药品风险最小化行动计划的制定[C]// 首届两岸四地中医药循证高峰论坛. 2015.
[8]林珊. 舒血宁注射液质量控制研究[D]. 福建中医药大学， 2014.
[9] 陈翔宇， 孙胜斌， 冯玉康，等. 基于黄酮类水平评价不同厂家舒血宁注射液的质量[J]. 世界科学技术-中医药现代化， 2016， 18（6）：1056-1061.
[10]郭玉东. 舒血宁注射液药效学再评价及生物活性测定法用于其质量控制的研究[D]. 北京中医药大学， 2011.
[11] Ma C， Wang H， Lu X， et al. Metabolic fingerprinting investigation of Artemisia annua L. in different stages of development by gas chromatography and gas chromatography-mass spectrometry.[J]. Journal of Chromatography A， 2008， 1186（1-2）：412.
[12]肖小河， 金城， 赵中振，等. 论中药质量控制与评价模式的创新与发展[J]. 中国中药杂志， 2007， 32（14）：1377-1381.
关键词：聚醚砜滤芯，舒血宁注射液，除菌过滤，质量影响
除菌过滤是无菌制剂生产工艺的关键环节，除菌过滤器在无菌制剂生产过程中起到至关重要的作用。除菌过滤器是利用细菌不能通过致密的微孔滤材的原理，采用孔径不超过 0.22微米的滤膜除去气体或者液体中的微生物。聚醚砜（PES）是一种亲水性材料，具有耐温、耐水解的特点，常用于筒式过滤器进行无菌制剂除菌过滤[1]。本研究通过探讨舒血宁注射液生产过程中使用聚醚砜滤芯进行除菌过滤后对药品质量影响，意在寻找细菌截留效果好且对药物成分影响较小的除菌过滤方式，以降低药物质量风险。
1.仪器及试药
1.1仪器
PALL完整性测试仪（颇尔过滤器北京有限公司）
CPA225D电子天平（赛多利斯公司）
Agilent1260高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器，紫外检测器（安捷伦科技有限公司）
1.2试药及材料
假单胞菌 Brevundimonas diminuta（ATCC 19146）（中国食品药品检定研究院）
甲醇为色谱纯试剂（迪马科技公司）
磷酸、四氢呋喃、丙酮、醋酸钠、乙酸乙酯、盐酸为色谱纯试剂（天津市科密欧化学试剂有限公司）
槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素對照品、银杏内酯 A 对照品、银杏内酯 B 对照品、银杏内酯 C 对照品（中国食品药品检定研究院）
试验用水为二次蒸馏的纯化水
2.方法与结果
2.1试验方法
除菌滤芯在蒸汽压力0.1MPa下121℃灭菌30min处理后，滤芯冷却后安装于过滤器上，用注射用水将滤芯充分浸湿后，取测试料液2L于40℃滤速5L/min循环过滤2h，过滤后的滤芯用5%氢氧化钠溶液浸泡5min后，用70℃注射用水冲洗30min。
2.2观察项目
2.2.1滤芯完整性测试
采用PALL完整性测试仪测定滤芯使用前后的泡点值，确认除菌滤芯完整性。测试压力 2 750 mbar，测试时间600 s，最小泡点值3400 mbar，最大压力6000 mbar。
2.2.2细菌截留实验
将适量假单胞菌溶于舒血宁注射液中制成浓度达107/cm2EFA（有效过滤面积）以上作为挑战菌溶液，取挑战菌溶液2L装入储罐中，通入压缩空气，测试菌液会依次通过测试过滤器及下游的测试膜片，循环过滤2h后，取出下游测试膜片并进行培养，观察其是否有菌落生成。
2.2.3总黄酮醇苷及银杏内酯含量
取舒血宁注射液滤前和滤后的样品三批，参照舒血宁注射液质量标准[2]中总黄酮醇苷和银杏内酯含量项下方法，分别测定槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，总黄酮醇苷含量= （槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量）×2.51。分别测定银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的含量，银杏内酯含量= （银杏内酯A含量+银杏内酯B含量+银杏内酯C含量）。
3.结果
3.1滤芯完整性测试
经测试，该型号的滤芯过滤前后泡点值均大于3 200 mbar，过滤前后滤芯完整性均符合规定。过滤前后泡点值相对偏差均未超过5%，表明舒血宁注射液除菌过滤生产过程中未对聚醚砜滤芯产生侵蚀等不良影响。详见表一。
3.2细菌截留实验
取出下游测试膜片并进行培养，逐日进行观察无菌落生长。结果表明聚醚砜滤芯细菌截留能力良好。
3.3总黄酮醇苷及银杏内酯含量
经检验，舒血宁注射液过滤前后总黄酮醇苷及银杏内酯含量无显著变化，说明过滤时聚醚砜滤芯对舒血宁注射液的总黄酮醇苷及银杏内酯成分无吸附等不良影响。详见表二。
4.讨论
舒血宁注射液主要的化学成分包括银杏酸类、内酯类和黄酮类化合物，是银杏叶经提取制成的灭菌水溶液，具有扩张血管，改善微循环的功效。在临床应用多年，疗效确切，为国家中药保护品种。然而，近年来随着中药注射剂不良反应报道的增多，舒血宁注射液的安全性问题的关注度不断提高[3-5]。
除菌过滤技术是借助过滤器材将药物溶液中细菌或杂质进行截留，从而对药物中的杂质和细菌进行有效控制，提高药物的安全性和有效性。高质量的过滤器材及全面的验证对注射剂药品质量将提供更有效的保障，从而降低药品生产中的风险[6-8]。《药品生产质量管理规范》（2010年修订）中明确规定：“与药品直接接触的生产设备表面应当平整、光洁、易清洗或消毒、耐腐蚀，不得与药品发生化学反应、吸附药品或向药品中释放物质”。本研究就与舒血宁注射液直接接触的聚醚砜滤芯对药物质量影响进行探讨，结果显示舒血宁注射液除菌过滤生产过程中未对聚醚砜滤芯产生侵蚀等不良影响，滤芯细菌截留能力良好，滤芯对舒血宁注射液的总黄酮醇苷及银杏内酯成分无吸附。聚醚砜滤芯对舒血注射液生产质量无显著影响，可用于除菌过滤生产。
有研究指出使用前和使用后对除菌过滤和成品过滤器进行完整性测试是无菌保障的一个至关重要的环节。在进行完整性测试时，需要考虑在对多芯过滤器进行起泡点测试时，总气体流量掩盖了其中某一支不完整滤芯的偏高的气体流量。总扩散流可能会掩饰了其中某支滤芯的处于临界的不完整性，导致错误的判定，不能发现不完整的过滤器[9-12]。后续研究中还需要进行相关的研究和积累，由此可见过滤工艺验证并非一次性的工作，还需根据产品质量和风险评估情况进行再验证。 参考文献
[1] 靳文静， 韩天娇， 乔龙娟. 除菌过滤器在医药领域的应用[J]. 科协论坛， 2013（10）：95-96.
[2] 赵玉欣， 高会芹， 张浩军，等. 舒血宁注射液精制工艺的优化研究[J]. 中国药物警戒， 2015， 12（9）：542-546.
[3] 林珊. 舒血宁注射液质量控制研究[D]. 福建中医药大学， 2014.
[4] 倪华丽， 马晓红. 浅談过滤器材在注射剂生产中的应用[J]. 药学研究， 2011， 30（11）：675-677.
[5] 关一鸣. 液体除菌过滤系统设计、灭菌及完整性检测[J]. 科技创新與应用， 2012（27）：19-19.
[6] 何冬雪， 张丽丽. 舒血宁注射液生产工艺规程[J]. 中国科技博览， 2012（18）：251-251.
[7] 杨薇， 谢雁鸣. 舒血宁注射液安全性研究及其药品风险最小化行动计划的制定[C]// 首届两岸四地中医药循证高峰论坛. 2015.
[8]林珊. 舒血宁注射液质量控制研究[D]. 福建中医药大学， 2014.
[9] 陈翔宇， 孙胜斌， 冯玉康，等. 基于黄酮类水平评价不同厂家舒血宁注射液的质量[J]. 世界科学技术-中医药现代化， 2016， 18（6）：1056-1061.
[10]郭玉东. 舒血宁注射液药效学再评价及生物活性测定法用于其质量控制的研究[D]. 北京中医药大学， 2011.
[11] Ma C， Wang H， Lu X， et al. Metabolic fingerprinting investigation of Artemisia annua L. in different stages of development by gas chromatography and gas chromatography-mass spectrometry.[J]. Journal of Chromatography A， 2008， 1186（1-2）：412.
[12]肖小河， 金城， 赵中振，等. 论中药质量控制与评价模式的创新与发展[J]. 中国中药杂志， 2007， 32（14）：1377-1381.