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关于支原体检验问题
支原体的检查方法很多,有免疫荧光法、间接血凝法、DNA探针法、PCR法、培养法等,国家规定的“金标准”方法是培养法。迄今已知的支原体有150余种,其中与人类有关的有16种,从泌尿生殖道中分离的有8种。目前,多数研究者认为引起泌尿生殖道感染的至少有三种,即UU、MH及生殖支原体(M.genitalium,MG)。因此,在一般临床诊断上,比较完善的支原体常规检验,至少包括上述3种,但由于MG分离培养的难度很大(主要是生长十分缓慢,阳性标本最长需要35～140天),只能依靠PCR技术或DNA探针来检查,故常规的支原体检验目前只能做UU和MH两种,如果为了节省,只做UU一种,则至少可能将1/3以上的支原体感染病例漏诊。
关于支原体致病问题
前己述及,支原体特别是UU的检出率很高,尤以女性为甚,在临床工作中发现有些支原体阳性者并无明显的感染症状,进一步研究证实支原体可以正常寄居于人体腔道的黏膜上,在肌体免疫力低下或黏膜受损时,寄居的支原体可以黏附并进入黏膜细胞,释放有毒的代谢产物如过氧化氢及氨等,引起细胞损伤,这时,支原体即发展成为致病菌。有研究证实正常青春期少女下生殖道中UU检出率为5%～22%,MH检出率为8%～17%,正常成年女性检出率则更高。很多人认为当寄居的支原体发展成致病原时,其检出数量上应该有明显变化,量的研究证实了这一观点,并在90初建立了支原体数理测定法,如集落形单位(cfu)计数法、颜色改变单位(ccu)测定法、Dienes菌落染色法等,这些经典的方法比较繁琐费时,法国梅里埃公司于90年代中期首先设计和推出了UU和MH的分离、鉴定、计数和药敏的一体化试剂盒,在支原体计数上,将UU和MH分为≥104ccu/ml及<104ccu/ml两个等级,简便实用,很快受到各国欢迎。1999年第7版《临床微生物手册》明确提出:除正常时无菌的体液或组织标本可以不做支原体定量培养外,在非无菌部位(如下生殖道、下泌尿道)采取的标本检查支原体时,必须做定量培养,检出数量≥104ccu/ml与感染有关,检出数量<104ccu/ml,无重要意义。
关于支原体耐药问题
支原体是没有细胞壁的微生物,对作用于细胞壁的抗生素(如青霉素类、头孢类)天然耐药,传统的治疗经验UU感染一般在大环内酯类、四环素类、喹诺酮类等抗生素中选择适当的药物,MH感染一般以林可霉素类为首选,大环内酯类对MH的效果很差。
近年来,支原体的耐药现象已在各地出现,很多原来敏感的抗生素,不同程度的产生耐药,久治不愈的病例屡见不鲜,几乎各省市都对支原体(特别是UU)的耐药现象做过研究报道。尽管各地报道的结果不完全一致,但敏感率不断下降的趋势是相同的。例如有人统计原来对UU抗菌活性最强的多西环素、司巴沙星,近年其敏感率已降至60%～70%,米诺环素敏感率也只有50%～60%,环西沙星、培氟沙星、氧氟沙星等敏感率降至20%～40%,治疗UU首选的大环内酯类药物中,敏感率降至60%～70%。
关于标本采集与运送问题
标本采取与运送是否正确,对检验结果影响很大,国内权威机构的一次调查,目前各级医疗单位88%的性病检验标本由临床医师采取,经检查,采取标本的合格率仅为46%,看来这是影响检验正确性的重要因素之一。为了提高标本采取的合格率,应加强对临床医师的培训,有条件的单位可改由实验室人员采取。
支原体在干燥和寒冷环境中会很快失去活性,由于其对上皮细胞有很强亲和力,采取时应尽可能多取细胞,标本中细胞的多少与支原体数量直接相关。采取的标本应立即接种在液体培养基,并在1小时内送检验室,不可置普通冰箱或-20℃冰箱保存,检验室在收到标本后,应立即处理,并放置在35℃孵箱内孵育。
女性必须取宫颈分泌物,暴露宫颈后,应先用棉拭子擦净宫颈口,用另一棉拭子伸入宫颈1～2cm,旋转360°,并停留20秒以上,获取较多的上皮细胞。男性须取尿道分泌物,用男性拭子伸入前尿道2～4cm,旋转360°,并停留20s以上,根据病情需要,也可采取前列腺按摩液、精液等。
男、女尿液培养支原体阳性率明显低于尿道(宫颈)分泌物,一般不推荐使用尿液,如必须使用尿液,可留取早晨中段尿置无菌容器,高速离心后取沉淀物接种培养基。
病损组织渗透、渗出液取材时应先去除表面的污物、痂皮等,再用棉球擦抹病损表面取材,组织块标本应在灭菌乳钵或玻璃匀浆后接种,羊水标本处理方法与尿液相同。
各种标本均应避免被制菌剂、消毒剂、润滑剂污染。>48小时不能接种的标本,宜放入-70℃以下环境或置液氮中保存,接种前,应在37℃水中快速融化。
讨 论
支原体是在1898年发现的,是一种简单的原核生物。支原体可以在特殊的培养基上接种生长,用此法配合临床进行诊断。与泌尿生殖道感染有关的主要是分解尿素支原体和人型支原体两种,约有20%～30%的非淋菌性尿道炎的病人,是由以上两种支原体引起的,是非淋菌性尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌。在成年人的泌尿生殖道中分解尿素支原体和人型支原体感染率主要与性活动有关,也就是说,与性交次数的多少、性交对象的数量有关,不管男女两性都是如此。据统计女性的支原体感染率更高些,说明女性的生殖道比男性生殖道更易生长支原体。另外,分解尿素支原体的感染率要比人型支原体的感染率为高。支原体不侵入机体组织与血液,而是在呼吸道或泌尿生殖道上皮细胞粘附并定居后,通过不同机制引起细胞损伤。
参考文献
1 卫生部医政司.全国临床检验操作规程.南京:东南大学出版社,1997:315.
支原体的检查方法很多,有免疫荧光法、间接血凝法、DNA探针法、PCR法、培养法等,国家规定的“金标准”方法是培养法。迄今已知的支原体有150余种,其中与人类有关的有16种,从泌尿生殖道中分离的有8种。目前,多数研究者认为引起泌尿生殖道感染的至少有三种,即UU、MH及生殖支原体(M.genitalium,MG)。因此,在一般临床诊断上,比较完善的支原体常规检验,至少包括上述3种,但由于MG分离培养的难度很大(主要是生长十分缓慢,阳性标本最长需要35～140天),只能依靠PCR技术或DNA探针来检查,故常规的支原体检验目前只能做UU和MH两种,如果为了节省,只做UU一种,则至少可能将1/3以上的支原体感染病例漏诊。
关于支原体致病问题
前己述及,支原体特别是UU的检出率很高,尤以女性为甚,在临床工作中发现有些支原体阳性者并无明显的感染症状,进一步研究证实支原体可以正常寄居于人体腔道的黏膜上,在肌体免疫力低下或黏膜受损时,寄居的支原体可以黏附并进入黏膜细胞,释放有毒的代谢产物如过氧化氢及氨等,引起细胞损伤,这时,支原体即发展成为致病菌。有研究证实正常青春期少女下生殖道中UU检出率为5%～22%,MH检出率为8%～17%,正常成年女性检出率则更高。很多人认为当寄居的支原体发展成致病原时,其检出数量上应该有明显变化,量的研究证实了这一观点,并在90初建立了支原体数理测定法,如集落形单位(cfu)计数法、颜色改变单位(ccu)测定法、Dienes菌落染色法等,这些经典的方法比较繁琐费时,法国梅里埃公司于90年代中期首先设计和推出了UU和MH的分离、鉴定、计数和药敏的一体化试剂盒,在支原体计数上,将UU和MH分为≥104ccu/ml及<104ccu/ml两个等级,简便实用,很快受到各国欢迎。1999年第7版《临床微生物手册》明确提出:除正常时无菌的体液或组织标本可以不做支原体定量培养外,在非无菌部位(如下生殖道、下泌尿道)采取的标本检查支原体时,必须做定量培养,检出数量≥104ccu/ml与感染有关,检出数量<104ccu/ml,无重要意义。
关于支原体耐药问题
支原体是没有细胞壁的微生物,对作用于细胞壁的抗生素(如青霉素类、头孢类)天然耐药,传统的治疗经验UU感染一般在大环内酯类、四环素类、喹诺酮类等抗生素中选择适当的药物,MH感染一般以林可霉素类为首选,大环内酯类对MH的效果很差。
近年来,支原体的耐药现象已在各地出现,很多原来敏感的抗生素,不同程度的产生耐药,久治不愈的病例屡见不鲜,几乎各省市都对支原体(特别是UU)的耐药现象做过研究报道。尽管各地报道的结果不完全一致,但敏感率不断下降的趋势是相同的。例如有人统计原来对UU抗菌活性最强的多西环素、司巴沙星,近年其敏感率已降至60%～70%,米诺环素敏感率也只有50%～60%,环西沙星、培氟沙星、氧氟沙星等敏感率降至20%～40%,治疗UU首选的大环内酯类药物中,敏感率降至60%～70%。
关于标本采集与运送问题
标本采取与运送是否正确,对检验结果影响很大,国内权威机构的一次调查,目前各级医疗单位88%的性病检验标本由临床医师采取,经检查,采取标本的合格率仅为46%,看来这是影响检验正确性的重要因素之一。为了提高标本采取的合格率,应加强对临床医师的培训,有条件的单位可改由实验室人员采取。
支原体在干燥和寒冷环境中会很快失去活性,由于其对上皮细胞有很强亲和力,采取时应尽可能多取细胞,标本中细胞的多少与支原体数量直接相关。采取的标本应立即接种在液体培养基,并在1小时内送检验室,不可置普通冰箱或-20℃冰箱保存,检验室在收到标本后,应立即处理,并放置在35℃孵箱内孵育。
女性必须取宫颈分泌物,暴露宫颈后,应先用棉拭子擦净宫颈口,用另一棉拭子伸入宫颈1～2cm,旋转360°,并停留20秒以上,获取较多的上皮细胞。男性须取尿道分泌物,用男性拭子伸入前尿道2～4cm,旋转360°,并停留20s以上,根据病情需要,也可采取前列腺按摩液、精液等。
男、女尿液培养支原体阳性率明显低于尿道(宫颈)分泌物,一般不推荐使用尿液,如必须使用尿液,可留取早晨中段尿置无菌容器,高速离心后取沉淀物接种培养基。
病损组织渗透、渗出液取材时应先去除表面的污物、痂皮等,再用棉球擦抹病损表面取材,组织块标本应在灭菌乳钵或玻璃匀浆后接种,羊水标本处理方法与尿液相同。
各种标本均应避免被制菌剂、消毒剂、润滑剂污染。>48小时不能接种的标本,宜放入-70℃以下环境或置液氮中保存,接种前,应在37℃水中快速融化。
讨 论
支原体是在1898年发现的,是一种简单的原核生物。支原体可以在特殊的培养基上接种生长,用此法配合临床进行诊断。与泌尿生殖道感染有关的主要是分解尿素支原体和人型支原体两种,约有20%～30%的非淋菌性尿道炎的病人,是由以上两种支原体引起的,是非淋菌性尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌。在成年人的泌尿生殖道中分解尿素支原体和人型支原体感染率主要与性活动有关,也就是说,与性交次数的多少、性交对象的数量有关,不管男女两性都是如此。据统计女性的支原体感染率更高些,说明女性的生殖道比男性生殖道更易生长支原体。另外,分解尿素支原体的感染率要比人型支原体的感染率为高。支原体不侵入机体组织与血液,而是在呼吸道或泌尿生殖道上皮细胞粘附并定居后,通过不同机制引起细胞损伤。
参考文献
1 卫生部医政司.全国临床检验操作规程.南京:东南大学出版社,1997:315.