miR-125b-5p对过氧化氢诱导的视网膜神经节细胞损伤的影响及其机制研究

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目的 研究miR-125b-5p对H2O2诱导的小鼠视网膜神经节细胞(RGCs)损伤的影响及潜在的机制.方法 将RGC-5分为12组:对照组(细胞未处理组)、H2O2组(200 μmol·L-1 H2O2处理12 h建立氧化损伤模型)、miR-NC组、miR-125-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-125-5p组、H2O2+miR-NC组、H2O2+ miR-125b-5p组、H2O2+ si-NC组、H2O2+ si-LCN2组、H2O2+ miR-125b-5p+ pcDNA组和H2O2+ miR-125b-5p+ pcDNA-LCN2组.H2O2+转染组:细胞转染miR-125b-5p或si-LCN2 48 h后,用200μmol·L-H2O2处理12 h.以免疫印迹法检测细胞中miR-125b-5p和LCN2蛋白表达水平,以流式细胞术和免疫印迹法分别检测凋亡率及其凋亡相关的B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,可见分光光度法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平.结果 (1)对照组和H2O2组的miR-125b-5p蛋白表达水平分别为1.01±0.09,0.39±0.04;这2组的LCN2蛋白表达水平分别为0.43±0.04,0.87±0.08;这2组的MDA含量分别为(5.06±0.49),(15.24±1.37) nmol·mg-1;这2组的SOD水平分别为(3.79±0.35),(0.56±0.05)U·mg-1;这2组的细胞凋亡率分别为(7.25±0.73)%,(27.69±2.86)%;这2组的Bax蛋白表达水平分别为0.22±0.03,0.63±0.06;这2组的Bcl-2蛋白表达水平分别为0.77±0.07,0.34±0.03,组间比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05).(2)转染miR-125b-5p后,H2O2+ miR-NC组和H2O2+ miR-125b-5p组的miR-125b-5p蛋白表达水平分别为0.39±0.04,0.89±0.08;这2组的Bcl-2蛋白表达水平分别为0.34±0.03,0.64±0.06;这2组的Bax蛋白表达水平分别为0.64±0.06,0.35 ±0.03;这2组的细胞凋亡率分别为(29.67±2.86)%,(12.65±1.46)%;这2组的MDA含量分别为(15.47±1.36),(8.36±0.79)nmol·mg-1;这2组的SOD水平分别为(0.48±0.04),(3.15 ±0.31)U·mg-1,组间比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P <0.05).(3)过表达miR-125b-5p和LCN2后,H2O2+ miR-125b-5p+ pcDNA组和H2O2 +miR-125b-5p+pcDNA-LCN2组的LCN2蛋白表达水平分别为0.37±0.04,0.74±0.07;这2组的Bcl-2蛋白表达水平分别为0.67±0.05,0.44±0.04;这2组的Bax蛋白表达水平分别为0.27±0.03,0.49±0.04;这2组的细胞凋亡率分别为(11.69±1.27)%,(22.45±2.08)%;这2组的MDA含量分别为(8.83±0.85),(12.24±1.27)nmol·mg-1;这2组的SOD水平分别为(3.29±0.31),(1.02±0.09)U·mg-1,组间比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P <0.05).结论 miR-125b-5p通过靶向调控LCN2水平,减轻心O2对RGCs的损伤并抑制细胞凋亡.
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