论文部分内容阅读
【摘要】 目的 探讨CIK细胞治疗中晚期消化系恶性肿瘤患者治疗前后免疫功能变化。方法 选择笔者所在医院2010年6月~2011年4月收治的中晚期消化系恶性肿瘤患者42例和35例健康体检者，采用流式细胞术检测患者外周血中免疫指标变化。并比较应用CIK细胞治疗前后免疫指标的表达。结果 治疗前后CD4、CD19、CD3/CD16+CD56比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 CIK细胞治疗中晚期消化系肿瘤，能够减轻患者化疗不良反应, 提高患者免疫功能，为患者提供了一种可以延长生存期、提高生活质量的新途径。
【关键词】 CIK细胞； 中晚期消化系恶性肿瘤； 流式细胞术
近年来，中晚期消化系恶性肿瘤的发病率越来越高，严重影响到患者及其家人的身心健康和生活质量。中晚期消化系恶性肿瘤病程发展快，患者就诊时往往已属中晚期，失去了手术治疗的机会［1］。目前治疗细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced kil1ers，CIK）已经成为治疗恶性肿瘤的一个全新的领域。CIK可在体外可大量扩增，并具有一定的抗肿瘤效应。特别适用于那些对手术、放疗、化疗已无适应证的患者，因而成为治疗恶性肿瘤的重要辅助治疗方法［2］。本文选取笔者所在医院2010年6月~2011年4月共有42例中晚期消化系恶性肿瘤患者接受CIK细胞治疗，采用流式细胞术检测淋巴细胞的一些表面抗原在中晚期消化系恶性肿瘤患者外周血中的表达，并研究CIK细胞治疗前后患者免疫功能改变，为临床治疗恶性肿瘤提供科学的依据。现将结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组消化道恶性肿瘤患者共42例（观察组），均经影像学、细胞学及病理学检查等确诊；其中男25例，女17例；年龄28~75岁，平均（56.7±4.2）岁，其中40～60岁者占92.4%；根据国际抗癌联盟（UICC）分期标准进行临床分期，其中Ⅰ~Ⅱ期5例(11.9%)，Ⅲ~Ⅳ期38例(90.48%)；病程最长2年。肿瘤分布：食管癌12例，肝癌9例，结肠癌7例，胃癌11例，胰腺癌3例。对照组35例为健康体检者，其中男性17例，女性13例；年龄27~60岁，平均（41.6±3.9）岁。两组患者在年龄和性别上比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 主要试剂及仪器 小鼠抗人单克隆抗体CD4/CD8/CD3、CD19、CD3/CD16+CD56及同型对照，红细胞裂解液均为广州长瑞生物有限公司。流式细胞仪为美国Beck-man Coulter公司产品。
1.3 CIK细胞制备及流式细胞检测 参照有关文献［3］对CIK 细胞进行制备及回输。静脉血均于清晨空腹抽取2 ml, EDTA 抗凝。取不同荧光标记的单克隆抗体CD4/CD8/CD3、CD3/CD16+CD56、CD19各20 μl放入试管中，分别加入100 μl抗凝外周血，室温下孵育15 min，加入红细胞裂解液500 μl，以1500 r/min的速率离心5 min，弃上清液，PBS 洗涤2 次。上流式细胞仪，每个样品检测5000个以上的细胞，用Cellquest软件分析计算淋巴细胞中各标记细胞的比例。
1.4 统计学处理 所有数据应用SPSS 17.0统计软件处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组免疫指标比较 与对照组比较观察组各免疫指标均有统计学意义（P<0.05）。说明中晚期消化系恶性肿瘤患者的免疫功能下降。见表1。
2.2 CIK细胞治疗前后恶性肿瘤组各免疫指标变化 CIK细胞治疗前与CIK细胞治疗后比较，CD3、CD4、CD19、CD3/CD16+CD56免疫指标明显升高，治疗前后比较差异性显著（P<0.05）；而CD8却有所降低，治疗前后比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。
3 讨论
目前CIK细胞已应用于部分临床恶性肿瘤的治疗，并取得了较好的效果。体外及动物研究证实CIK细胞的优势在于增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、对正常骨髓造血前体细胞毒性小等。国内外制备的用于过继免疫治疗的CIK细胞实际是体外扩增出的异质性细胞群，以CD3+CD56+、CD3+D8+T淋巴细胞为主。采用CIK细胞治疗，可以在不损伤机体免疫系统结构和功能的前提下，将肿瘤细胞直接杀伤，并且对机体的免疫功能起到调节和增强的作用［4］。本研究结果显示，CIK细胞治疗后观察组各免疫指标比治疗前除CD8外，均有不同程度的升高，说明患者免疫功能在提高。
综上所述，采用流式细胞术对外周血免疫指标的变化进行检测为临床观察中晚期消化系恶性肿瘤患者C1K细胞治疗前后免疫功能的变化提供了有效的依据；CIK细胞治疗中晚期消化系统恶性肿瘤，可激活T淋巴细胞而改善免疫功能；外周血免疫指标可用于治疗效果的评价。
参 考 文 献
［1］ 关红梅.自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)过继性免疫治疗恶性肿瘤的临床观察［J］.中国现代药物应用，2011，5(6)：68-69.
［2］ 李星逾，孙志为，莫一我.自体CIK细胞联合胸腺素α1治疗消化系统统恶性肿瘤疗效观察［J］.山东医药，2010，50(18)：67-68.
［3］ 杨轩璇，蒋敬庭，石亮荣，等.自体CIK细胞联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌［J］.苏州大学学报（医学版），2008，28(2)：237-239.
［4］ 邓笑伟，徐铭宝，高锦，等.自体和异体CIK细胞联合树突状细胞治疗原发性肝癌研究［J］.科技导报，2008，26(7)：51-53.
（收稿日期：2011-10-12）
（本文编辑：梅宏伟）
【关键词】 CIK细胞； 中晚期消化系恶性肿瘤； 流式细胞术
近年来，中晚期消化系恶性肿瘤的发病率越来越高，严重影响到患者及其家人的身心健康和生活质量。中晚期消化系恶性肿瘤病程发展快，患者就诊时往往已属中晚期，失去了手术治疗的机会［1］。目前治疗细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced kil1ers，CIK）已经成为治疗恶性肿瘤的一个全新的领域。CIK可在体外可大量扩增，并具有一定的抗肿瘤效应。特别适用于那些对手术、放疗、化疗已无适应证的患者，因而成为治疗恶性肿瘤的重要辅助治疗方法［2］。本文选取笔者所在医院2010年6月~2011年4月共有42例中晚期消化系恶性肿瘤患者接受CIK细胞治疗，采用流式细胞术检测淋巴细胞的一些表面抗原在中晚期消化系恶性肿瘤患者外周血中的表达，并研究CIK细胞治疗前后患者免疫功能改变，为临床治疗恶性肿瘤提供科学的依据。现将结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组消化道恶性肿瘤患者共42例（观察组），均经影像学、细胞学及病理学检查等确诊；其中男25例，女17例；年龄28~75岁，平均（56.7±4.2）岁，其中40～60岁者占92.4%；根据国际抗癌联盟（UICC）分期标准进行临床分期，其中Ⅰ~Ⅱ期5例(11.9%)，Ⅲ~Ⅳ期38例(90.48%)；病程最长2年。肿瘤分布：食管癌12例，肝癌9例，结肠癌7例，胃癌11例，胰腺癌3例。对照组35例为健康体检者，其中男性17例，女性13例；年龄27~60岁，平均（41.6±3.9）岁。两组患者在年龄和性别上比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 主要试剂及仪器 小鼠抗人单克隆抗体CD4/CD8/CD3、CD19、CD3/CD16+CD56及同型对照，红细胞裂解液均为广州长瑞生物有限公司。流式细胞仪为美国Beck-man Coulter公司产品。
1.3 CIK细胞制备及流式细胞检测 参照有关文献［3］对CIK 细胞进行制备及回输。静脉血均于清晨空腹抽取2 ml, EDTA 抗凝。取不同荧光标记的单克隆抗体CD4/CD8/CD3、CD3/CD16+CD56、CD19各20 μl放入试管中，分别加入100 μl抗凝外周血，室温下孵育15 min，加入红细胞裂解液500 μl，以1500 r/min的速率离心5 min，弃上清液，PBS 洗涤2 次。上流式细胞仪，每个样品检测5000个以上的细胞，用Cellquest软件分析计算淋巴细胞中各标记细胞的比例。
1.4 统计学处理 所有数据应用SPSS 17.0统计软件处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组免疫指标比较 与对照组比较观察组各免疫指标均有统计学意义（P<0.05）。说明中晚期消化系恶性肿瘤患者的免疫功能下降。见表1。
2.2 CIK细胞治疗前后恶性肿瘤组各免疫指标变化 CIK细胞治疗前与CIK细胞治疗后比较，CD3、CD4、CD19、CD3/CD16+CD56免疫指标明显升高，治疗前后比较差异性显著（P<0.05）；而CD8却有所降低，治疗前后比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。
3 讨论
目前CIK细胞已应用于部分临床恶性肿瘤的治疗，并取得了较好的效果。体外及动物研究证实CIK细胞的优势在于增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、对正常骨髓造血前体细胞毒性小等。国内外制备的用于过继免疫治疗的CIK细胞实际是体外扩增出的异质性细胞群，以CD3+CD56+、CD3+D8+T淋巴细胞为主。采用CIK细胞治疗，可以在不损伤机体免疫系统结构和功能的前提下，将肿瘤细胞直接杀伤，并且对机体的免疫功能起到调节和增强的作用［4］。本研究结果显示，CIK细胞治疗后观察组各免疫指标比治疗前除CD8外，均有不同程度的升高，说明患者免疫功能在提高。
综上所述，采用流式细胞术对外周血免疫指标的变化进行检测为临床观察中晚期消化系恶性肿瘤患者C1K细胞治疗前后免疫功能的变化提供了有效的依据；CIK细胞治疗中晚期消化系统恶性肿瘤，可激活T淋巴细胞而改善免疫功能；外周血免疫指标可用于治疗效果的评价。
参 考 文 献
［1］ 关红梅.自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)过继性免疫治疗恶性肿瘤的临床观察［J］.中国现代药物应用，2011，5(6)：68-69.
［2］ 李星逾，孙志为，莫一我.自体CIK细胞联合胸腺素α1治疗消化系统统恶性肿瘤疗效观察［J］.山东医药，2010，50(18)：67-68.
［3］ 杨轩璇，蒋敬庭，石亮荣，等.自体CIK细胞联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌［J］.苏州大学学报（医学版），2008，28(2)：237-239.
［4］ 邓笑伟，徐铭宝，高锦，等.自体和异体CIK细胞联合树突状细胞治疗原发性肝癌研究［J］.科技导报，2008，26(7)：51-53.
（收稿日期：2011-10-12）
（本文编辑：梅宏伟）