【摘 要】
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目的应用慢病毒介导的shRNA基因沉默技术,有效沉默人胰腺癌细胞株Panc-1中Vimentin表达,并探讨下调Vimentin后对Panc-1细胞侵袭运动及粘附能力的影响及其机制。方法 Lv-VIM-G
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科,贵阳医学院附属医院肝胆外科
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目的应用慢病毒介导的shRNA基因沉默技术,有效沉默人胰腺癌细胞株Panc-1中Vimentin表达,并探讨下调Vimentin后对Panc-1细胞侵袭运动及粘附能力的影响及其机制。方法 Lv-VIM-GFP-shRNA慢病毒转染人胰腺癌细胞株Panc-1,Real-time PCR、Western blot和免疫荧光法检测慢病毒转染后Vimentin的沉默效率;Transwell小室体外运动侵袭实验及划痕实验比较细胞运动侵袭能力变化,细胞粘附实验检测细胞粘附能力的变化;Real-time PCR和Western blot检测肿瘤侵袭和粘附相关因子的表达,免疫荧光法观察转染前后细胞骨架蛋白F-actin和黏着斑激酶FAK的变化。结果 Lv-VIM-GFP-shRNA慢病毒转染Panc-1后能稳定下调其Vimentin的表达(P<0.01)。Transwell小室及划痕实验显示,下调Vimentin后能显著抑制Panc-1细胞的侵袭及迁移能力(P<0.01)。粘附实验结果显示,粘附30min后,转染Lv-VIM-GFP-shRNA组较对照组粘附CollagenⅣ和FN的细胞数量均减少(P<0.05)。下调Vimentin后对肿瘤侵袭及粘附相关因子的mRNA和蛋白水平无明显影响(P>0.05),但能引起细胞骨架F-actin的解聚以及黏着斑激酶FAK的重排。结论 Vimentin基因沉默后可能通过引起F-actin骨架解聚、黏着斑激酶FAK重排来降低细胞与细胞外基质的粘附及细胞运动能力,从而抑制胰腺癌细胞的侵袭和转移。
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