RNA干扰降低唾液酸酶3表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡影响的实验研究

• 作 者: 杨晓 李思 向尚 吴衣论 王琳 彭锦 冯颖
• 机 构: 四川省医学科学院·四川省人民医院骨科,成都610072;四川大学华西基础医学与法医学院,成都,610041;四川大学华西临床医学院,成都,610041;四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部
• 出 处: 中国修复重建外科杂志
• 发表日期: 2018年7期
• 关键词: 唾液酸酶 MG-63细胞 骨肉瘤 细胞增殖 细胞凋亡

目的 探讨下调唾液酸酶3 (neuraminidase 3,NEU3)表达对人成骨肉瘤MG-63细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法 取MG-63细胞行免疫荧光染色,观察MG-63细胞中NEU3的表达情况.然后根据处理方法不同将细胞分为5组:正常对照组(A组),不作任何处理;30、50、100 nmol/L NEU3 RNA干扰组(分别为B、C、D组),分别以浓度为30、50、100 nmol/L的NEU3小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)转染细胞;阴性对照组(E组),使用不同种属阴性对照siRNA(小鼠actin siRNA,50 nmol/L)转染细胞.转染后采用实时荧光定量PCR检测NEU3 mRNA水平,细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Ras蛋白和Bcl-2蛋白表达情况.结果 荧光显微镜观察示NEU3表达集中在MG-63细胞的细胞质中.实时荧光定量PCR检测示,培养24 h后B、C、D组NEU3 mRNA相对表达量明显低于A、E组(P＜0.05);随着siRNA浓度升高,B、C、D组NEU3 mRNA相对表达量呈下降趋势(P＜0.05).CCK-8法检测示,培养48 h后随NEU3 siRNA浓度升高,B、C、D组MG-63细胞抑制率显著升高,成活率显著降低,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测示,培养24 h后B、C、D组MG-63活细胞逐渐减少、坏死细胞逐渐增加(P＜0.05).B、C、D组细胞凋亡率与A组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);与E组比较,C、D组细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),B、E组间差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot检测示,培养24 h后,与A、E组比较,B、C、D组Ras和Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),而D组以上蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论 NEU3表达下降能够抑制骨肉瘤MG-63细胞的成活,促进细胞凋亡,提示NEU3可能是治疗骨肉瘤的潜在药物靶点.