猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选

• 作 者: 王垚 金前跃 周稳 李旭锋 柴永笑 丁培阳 陈晓 邢云瑞 李
• 机 构: 河南农业大学牧医工程学院,河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,西北农林科技大学
• 出 处: 河南农业科学
• 发表日期: 2019年10期
• 关键词: 猪伪狂犬病毒 gE蛋白 毕赤酵母 单克隆抗体 Pseudorabies virus gE protein Pichia pastoris Monoclonal
• 基金项目: 国家重点研发计划项目(2016YFD0500701)

为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株。通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定。同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、