【摘 要】
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目的 探讨腺病毒介导转染hTGF-β1(Ad-hTGF-β1)基因的兔脂肪干细胞(ADSCs)在体外定向诱导分化成软骨细胞的可行性.方法 含增加型绿色荧光蛋白基因(EGFP基因)的腺病毒表达载
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目的 探讨腺病毒介导转染hTGF-β1(Ad-hTGF-β1)基因的兔脂肪干细胞(ADSCs)在体外定向诱导分化成软骨细胞的可行性.方法 含增加型绿色荧光蛋白基因(EGFP基因)的腺病毒表达载体pAd-hTGF-β1,经293细胞包装重组腺病毒后,感染第3代培养的兔ADSCs.将转染与未转染hTGF-β1的ADSCs置于诱导培养液(CMM液)中行单层培养和包埋于藻酸钠微珠支架中行三维立体培养,定期观察细胞的大体形态学变化、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测目的基因hTGF-β1的表达及RT-PCR法、Western blot法和免疫组织化学法检测软骨特异性细胞外基质蛋白Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)的表达.结果 转染hTGF-β1组的ADSCs在单层培养中呈现形态规则、多角型细胞增多、增殖能力明显增强;转染后7 d与21 d在三维藻酸钠微珠支架中培养的ADSCs的hTGF-β1基因表达均明显升高,其RT-PCR结果与未转染组比较差异有统计学意义(P＜0.01).同时转染组的兔ADSCs分泌CollagenⅡ明显增多,转染后7 d与21 d的CollagenⅡRT-PCR、Western blot和免疫组织化学结果均明显高于未转染组(P＜0.01),并且转染组内其表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经Ad-hTGF-β1基因修饰的兔ADSCs在体外不需外来生长因子诱导下能定向分化成软骨细胞,且其分化能力强,外来基因hTGF-β1表达高、持续时间长,是理想的软骨组织工程的种子细胞,这也为转基因干细胞治疗软骨缺损提供理论依据.
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