Capn4通过黏着斑激酶磷酸化激活核转录因子-κB信号调控人肾癌细胞增殖

• 作 者: 庄乾锋 沈杰 王恺 钱曦 范敏 王坤 陆皓 徐仁芳 何小舟
• 机 构: 213003 常州，苏州大学附属第三医院泌尿外科,213003 常州，苏州大学附属第三医院泌尿外科,213003 常州，苏州大学附属第三医院泌尿外科,02155 波士顿，美国塔夫茨大学医学院分子生物学
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2018年35期
• 关键词: 肾细胞癌 钙蛋白酶小亚基1 黏着斑激酶 核因子活化B细胞κ轻链增强子

目的

探讨钙蛋白酶小亚基1(Capn4)的表达对肾透明细胞癌(ccRCC)增殖、迁移、侵袭的影响及其分子作用机制。

方法

选取Capn4高表达ccRCC细胞株786-O和低表达的Caki-1细胞株，采用慢病毒转染技术构建Capn4稳定低表达的786-O细胞株(786-O-shCapn4)和稳定过表达Capn4的Caki-1细胞株(Caki-1-Capn4)，通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)验证Capn4在转染肾细胞癌(RCC)细胞株中的表达。通过细胞增殖实验、划痕实验及Transwell实验观察Capn4对肾癌细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。通过Western blot法验证黏着斑激酶(FAK)、磷酸化FAK、核转录因子-κB(NF-κB)和磷酸化NF-κB的表达。

结果

细胞计数试剂盒(CCK-8)结果显示，Capn4过表达后细胞增殖能力过表达组高于对照组(P＝0.010)，而转染Capn4短发卡RNA(shRNA)后细胞增殖能力下调组低于对照组(P＝0.010)；划痕实验结果表明，24 h Caki1-Capn4细胞的迁移距离过表达组高于对照组(P＝0.001)，786-O-shCapn4细胞的迁移距离下调组低于对照组(P＝0.001)；Transwell结果表明，24 h Caki1-Capn4细胞的侵袭细胞数量过表达组高于对照组(P＝0.001)，786-O-shCapn4细胞的迁移距离下调组低于对照组(P＝0.001)；Western blot结果显示：Caki1-Capn4组FAK及NF-κB磷酸化水平较各自对照组上调(P＝0.010)，而786-O-shCapn4组FAK及NF-κB磷酸化水平较各自对照组下调(P＝0.010)；FAK特异性抑制剂(PF573228)或者NF-κB抑制剂QNZ均可抑制由Capn4过表达引起的癌细胞生长速度的增加。

结论

Capn4通过激活FAK和下游信号通路，从而激活NF-κB，进而促进RCC细胞生长。