【摘 要】
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目的 基于NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/Gasdermin D(GSDMD)通路探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导J774A.1巨噬细胞焦亡的调控机制.方法 将分化完全的J774A.1巨噬细胞分为空白血浆组、模型组、左归降糖舒心方含药血浆组、MCC950(NLRP3特异性抑制剂)组,每组6个复孔.除空白血浆组外,其余各组以100 mg·L-1ox-LDL诱导细胞,构建细胞焦亡模型.空白血浆组、模型组、MCC950(50
【机 构】
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湖南中医药大学,湖南长沙410208
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目的 基于NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/Gasdermin D(GSDMD)通路探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导J774A.1巨噬细胞焦亡的调控机制.方法 将分化完全的J774A.1巨噬细胞分为空白血浆组、模型组、左归降糖舒心方含药血浆组、MCC950(NLRP3特异性抑制剂)组,每组6个复孔.除空白血浆组外,其余各组以100 mg·L-1ox-LDL诱导细胞,构建细胞焦亡模型.空白血浆组、模型组、MCC950(50 μmol·L-1)组以含10％空白血浆进行培养,左归降糖舒心方含药血浆组用10％含药血浆培养细胞24 h.采用CCK-8法测定各组细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;采用LDH释放实验检测细胞膜完整性及细胞焦亡水平;采用ELISA法及免疫荧光法检测细胞白细胞介素(IL)1β、IL-18含量及蛋白表达情况;采用Western Blot法检测NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达.结果 与空白血浆组比较,模型组细胞的IL-18、IL-1β含量及LDH释放率明显增高(P＜0.01),IL-1β、IL-18及NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达明显上调(P＜0.01).与模型组比较,左归降糖舒心方含药血浆组细胞的IL-18、IL-1β3含量及LDH释放率明显下降(P＜0.01),IL-1β、IL-18及NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达明显下调(P＜0.01).结论 左归降糖舒心方含药血浆能够抑制ox-LDL诱导的J774A.1巨噬细胞焦亡状态及炎性反应,其作用机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路,下调细胞炎性因子IL-18、IL-1β表达有关.
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