敲除PLAC8蛋白对人胚肾细胞增殖的影响

• 作 者: 秦绪慧 马立群 欧阳聪 王海霞 浦易之 薛璐
• 机 构: 中南民族大学生命科学学院医学生物研究所武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室
• 出 处: 生物学杂志
• 发表日期: 2019年6期
• 关键词: CRISPR/Cas9 基因敲除 PLAC8 细胞增殖 MAPK信号通路 CRISPR/Cas9knockoutPLAC8cell proliferationM
• 基金项目: 湖北省自然科学基金一般面上项目(No.2018CFB594)

为了构建PLAC8蛋白敲除的人胚肾细胞株(293T)并检测其对293T细胞增殖的影响,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术及流式细胞分选术构建敲除PLAC8蛋白的293T细胞株,通过基因组测序及错配酶酶切进行编辑细胞系的筛选。用筛选得到的细胞系提取细胞总蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测编辑效率。进一步通过细胞生存实验(MTT实验)检测敲除PLAC8对293T细胞增殖的影响,通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测敲除PLAC8蛋白后293T细胞中增殖相关基因的表达水平变