【摘 要】
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目的:探讨环状RNA(circular RNA,circRNA)-整合素α1(integrin alpha 1,ITGA1)(circ-ITGA1)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞系进展转移功能的影响.方法:利用高通量测序技术筛选亲本MDA-MB-231细胞和高转移能MDA-MB-231-M细胞中差异表达的circRNAs,并采用实时荧光定量PCR法检测circ-ITGA1在乳腺癌细胞系中的表达情况.通过体外实验验证circ-ITGA1的环状特性,
【机 构】
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山东大学齐鲁医院乳腺外科,山东 济南 250012;山东大学齐鲁医院乳腺外科,山东 济南 250012;山东大学齐鲁医院标本库,山东 济南 250012;山东大学乳腺癌研究中心,山东 济南 25001
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目的:探讨环状RNA(circular RNA,circRNA)-整合素α1(integrin alpha 1,ITGA1)(circ-ITGA1)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞系进展转移功能的影响.方法:利用高通量测序技术筛选亲本MDA-MB-231细胞和高转移能MDA-MB-231-M细胞中差异表达的circRNAs,并采用实时荧光定量PCR法检测circ-ITGA1在乳腺癌细胞系中的表达情况.通过体外实验验证circ-ITGA1的环状特性,并采用脂质体法将特异性针对circ-ITGA1的siRNA及过表达载体转入TNBC细胞,建立circ-ITGA1沉默和过表达的细胞,并采用MTT法、克隆形成实验和EdU实验检测细胞增殖能力的变化,Transwell小室实验、划痕愈合实验检测迁移、侵袭速率的改变.最后利用相关数据库预测circ-ITGA1可能的靶基因及分子机制.结果:对乳腺癌高转移能细胞亚系(MDA-MB-231-M)及其亲本细胞系(MDA-MB-231)进行circRNA高通量测序,筛选出差异表达的circRNAs.其中,circ-ITGA1在TNBC细胞系中高表达并与恶性程度呈正相关(P均<0.01).利用Sanger测序技术在MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中检测到了circ-ITGA1独有的接头序列,并且circ-ITGA1具有抵抗RNA酶降解、半衰期延长、无poly(A)尾等circRNA相关的环状特性(P均<0.01).在细胞系中干扰circ-ITGA1可以显著抑制MTT增殖能力(P均<0.01)、克隆形成能力(P均<0.01)及细胞增殖活性(P均<0.01).同时,干扰circ-ITGA1可以抑制细胞的迁移、侵袭及划痕修复能力(P均<0.01).进一步实验表明过表达circ-ITGA1可以显著促进细胞的增殖、侵袭、迁移及划痕修复能力(P均<0.01).为了进一步研究circ-ITGA1发挥功能的相关机制,利用相关数据库预测到miR-624-5p可能与circ-ITGA1结合,并且miR-624-5p与患者的预后呈负相关(P均<0.05).随后利用Mioncocirc及miRNet数据库进行预测,发现LMBR1L可能是circ-ITGA1及miR-624-5p发挥功能的靶点,且LMBR1L与circ-ITGA1的表达呈正相关(r=0.319,P=0.016)并与miR-624-5p呈负相关(r=-0.313,P<0.01),同时LMBR1L的表达与乳腺癌患者的预后呈负相关(P均<0.05),表明circ-ITGA1可能通过影响miR-624-5p/LMBR1L信号轴发挥相应功能.结论:circ-ITGA1/miR-624-5p/LMBR1L信号轴可以促进TNBC细胞的进展和转移,这为进一步理解TNBC进展转移的分子机制提供了理论依据.
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