G肽对血管紧张素Ⅱ诱导人肾小管上皮细胞转化生长因子β1活化的影响

• 作 者: 吴开胤 王伟铭 黄秋花 陈楠
• 机 构: 上海交通大学附属瑞金医院肾脏科; 上海交通大学附属瑞金医院肾脏科; 上海市血液病研究所
• 出 处: 中华肾脏病杂志
• 发表日期: 2006年06期
• 关键词: 转化生长因子β 血管紧张素Ⅱ 凝血酶敏感蛋白1 HK-2细胞
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目(30270613)上海市重点学科基金(T0201)上海市卫生局重点学科基金(05Ⅲ001)上海市卫生局重点项目(2003ZD002)

目的观察根据血小板反应蛋白1(TSP1)分子WSHW序列人工合成的六肽 (GGWSHW,G肽)对由血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1过度活化的抑制作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),以未处理HK-2细胞为正常对照,以 AII刺激HK-2细胞(AngⅡ组),选择合成TSP1和TGF-β1最佳刺激浓度和时间。刺激前加入10 μmol／L G肽进行干预(G肽组),并以AngⅡ受体阻断剂洛沙坦(losartan)为抑制对照(losartan 组)。分别用RT-PCR和Western印迹检测TSP1和TGF-β1以及细胞外基质纤连蛋白(FN)和纤溶酶原活化物抑制剂-1(PAI-1)mRNA转录和蛋白表达。共聚焦显微镜和流式细胞仪观察TSP1 和TGF-β1的表达以及两者共表达。ELISA法检测培养细胞上清液中活性TGF-β1、总TGF-β1、 FN和PA1-1的分泌含量。Western印迹检测TGF-β1信号转导蛋白Smad2及磷酸化Smad2(p- Smad2)表达水平。结果 AngⅡ以时间和剂量依赖方式促进HK-2细胞合成TSP1和TGF-β1 (优化后分别为6 h的1μmol／L,12 h的0．1μmol／L)。与正常对照组比较,AngⅡ组TSP1与 TGF-β1阳性共表达的细胞数上调5．4倍;总TGF-β1和活性TGF-β1水平分别增加1．8和2．0 倍;p-Smad2蛋白水平明显上调;FN和PAI-1 mRNA转录水平分别上调3和1．5倍,且细胞上清液中两者含量分别增加2和1．9倍。G肽对TSP1和TGF-β1 mRNA转录和蛋白表达水平均无显著性影响,且对总TGF-β1分泌无明显抑制作用,但可显著抑制活性TGF-β1的水平。此外与 losartan组比较,G肽组p-Smad2蛋白表达减少28．9％,FN和PAl-1mRNA转录水平分别下调34． 5％和26％,且细胞上清液中两者含量分别减少11％和8．9％。结论TSP1肽抑制物体外能通过有效竞争抑制TSP1致HK-2细胞的TGF-B1活化作用,并可相应下调FN和PAI-1的合成分泌。