转基因高油酸油菜T-DNA插入拷贝数及整合位点分析

• 作 者: 陈松 张洁夫 浦惠明 申爱娟 周小婴 龙卫华 胡茂龙 戚存扣
• 机 构: 江苏省农业科学院经济作物研究所
• 出 处: 分子植物育种
• 发表日期: 2011年1期
• 关键词: 转基因高油酸油菜 基因拷贝数 整合位点

为获得转基因高油酸油菜T-DNA插入拷贝数及整合位点相关信息,本研究应用地高辛标记的NPTII基因片段为探针,与经BamHI酶切的转基因甘蓝型油菜高油酸株系W-4的T2代单株的基因组DNA进行Southern杂交。结果显示：W-4的T2代单株的基因组含有一个T-DNA拷贝。用3到4个根据载体pCNFIRnos序列设计的嵌套特异性引物分别与简并引物组合进行TAIL-PCR反应,扩增得到转基因油菜T-DNA插入位点的左、右边界旁侧序列。经分析右边界旁侧序列长度为470bp,其中180bp为载体序列,290bp