【摘 要】
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目的:观察番石榴叶总三萜(TTPGL)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损害的治疗作用,并探讨其对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)通路的调控作用.方法:采用醋酸脱氧皮质酮-盐制剂皮下注射联合高脂饲料喂养对50只SD大鼠建立糖尿病肾病(DN)模型,建模成功后采用随机数字表分为缬沙坦组,TTPGL低、中、高剂量组和模型组,另取8只SD大鼠记为正常对照组.缬沙坦组予以缬沙坦10 mg·kg-1溶于1 ml·100 g体质量-1生理盐水中灌胃,TTPGL低、中、高剂量组分别予以TTPG
【机 构】
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苏北人民医院药剂科,江苏扬州225001;苏北人民医院肾脏科,江苏扬州225001
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目的:观察番石榴叶总三萜(TTPGL)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损害的治疗作用,并探讨其对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)通路的调控作用.方法:采用醋酸脱氧皮质酮-盐制剂皮下注射联合高脂饲料喂养对50只SD大鼠建立糖尿病肾病(DN)模型,建模成功后采用随机数字表分为缬沙坦组,TTPGL低、中、高剂量组和模型组,另取8只SD大鼠记为正常对照组.缬沙坦组予以缬沙坦10 mg·kg-1溶于1 ml·100 g体质量-1生理盐水中灌胃,TTPGL低、中、高剂量组分别予以TTPGL 30、60、120 mg·kg-1溶于1 ml· 100 g体质量-1生理盐水中灌胃,模型组与正常对照组均予以等量生理盐水灌胃,每天1次,持续8周.分别用血糖仪、放射免疫法、酶联免疫法检测干预后空腹血糖(FBG)、24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr);苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏病理改变,透射电镜下观察亚细胞形态结构改变;实时-逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测大鼠肾组织mTOR、S6K1、自噬相关基因Beclin1、LC3、人肾病蛋白(Nephrin) mRNA表达;蛋白质免疫印迹法(WB)检测大鼠肾组织mTOR、S6K1、Beclin1、LC3 Ⅱ/Ⅰ、Nephrin蛋白表达及磷酸化mTOR/mTOR(p-mTOR/mTOR)、磷酸化S6K1/S6K1(p-S6K1/S6K1)水平.结果:DN建模成功率为92.00％;模型组FBG、24 h尿蛋白、BUN、Scr,肾组织mTOR、S6K1、Nephrin mRNA表达,肾组织p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1水平均高于正常对照组(P＜0.05),缬沙坦组和TTPGL 3个剂量组均低于模型组(P＜0.05);模型组Beclin1、LC3、Nephrin mRNA与蛋白相对表达量均低于正常对照组(P＜0.05),缬沙坦组和TTPGL 3个剂量组均高于模型组(P＜0.05);TTPGL的作用均呈剂量依赖性,且缬沙坦组与TTPGL中剂量组上述指标差异均无统计学意义(P＞0.05);正常对照组大鼠可见肾小球及肾小管形态正常,结构清晰,亚细胞结构正常,模型组可见肾小球基底膜显著增厚,囊腔轮廓严重不规则且显著增大,细胞分布严重不均且多见脂肪变性,肾小管可见严重萎缩塌陷,管壁细胞可见严重不规则,亚细胞结构显著改变,缬沙坦组和TTPGL 3个剂量组均改善,且TTPGL高剂量组与正常对照组最为接近.结论:TTPGL可减轻DN大鼠肾组织病理改变,增强肾功能,推测是通过抑制mTOR/S6K1通路,降低mTOR、S6K1表达和p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1水平,上调Beclin1、LC3、Nephrin表达发挥效应的.
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