【摘 要】
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目的建立叠氮溴乙啶(ethidium monoazide bromide,EMA)与定量PCR(qPCR)相结合检测公共场所空气中存活的嗜肺军团菌的方法。方法用培养的嗜肺军团菌进行实验以得到EMA处理的最
【机 构】
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中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所,
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目的建立叠氮溴乙啶(ethidium monoazide bromide,EMA)与定量PCR(qPCR)相结合检测公共场所空气中存活的嗜肺军团菌的方法。方法用培养的嗜肺军团菌进行实验以得到EMA处理的最适条件;采集嗜肺军团菌气溶胶模拟样品,采用EMA-qPCR(EMA处理组)和qPCR(对照组)验证其检测活菌的效果;并将该方法在公共场所进行现场应用实验。结果 EMA终浓度在2.5μg/ml、4℃孵育5min、光照5 min的处理条件下,可在基本不影响活菌PCR扩增的情况下使死菌qPCR的信号降低约2 lg,即可以抑制99%的死菌PCR扩增。当死菌和活菌的浓度比例不超过1 000∶1时,EMAqPCR方法可实现对空气中存活嗜肺军团菌的定量检测。采集的公共场所气溶胶样品中,EMA处理组和对照组的嗜肺军团菌阳性率分别为37.5%(15/40)和57.5%(23/40);在两组检测结果均为阳性的10对样品中,1对样品的检测结果相同,5对样品EMA处理组检测结果低于对照组,平均低0.70 lg copies/ml,4对样品EMA处理组的检测结果高于对照组,平均高0.65lg copies/ml。结论 EMA-qPCR方法可用于公共场所空气中嗜肺军团菌活菌的快速定量检测。
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